摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-12页 |
文献综述 | 第12-20页 |
第一章 单增李斯特菌研究进展 | 第12-20页 |
·单增李斯特菌生物学特性 | 第12页 |
·近年来我国部分地区食品中单增李斯特菌污染现状 | 第12-13页 |
·单增李斯特菌检测方法研究进展 | 第13-17页 |
·传统的分离鉴定 | 第13-14页 |
·免疫学检测方法 | 第14-15页 |
·分子生物学检测方法 | 第15-17页 |
·抗李斯特菌抗体研究进展 | 第17-18页 |
·本研究的目的意义 | 第18-20页 |
试验研究 | 第20-52页 |
第二章 单增李斯特菌溶血素O 的原核表达及其包涵体蛋白的重折叠 | 第20-29页 |
·材料与方法 | 第20-25页 |
·材料 | 第20-23页 |
·试验方法 | 第23-25页 |
·结果 | 第25-26页 |
·重组工程菌的诱导表达 | 第25页 |
·包涵体蛋白的变性溶解及纯化 | 第25页 |
·纯化蛋白的Western blot 检测 | 第25-26页 |
·目的蛋白的重折叠 | 第26页 |
·讨论 | 第26-29页 |
·包涵体的制备与变性溶解 | 第26-27页 |
·包涵体蛋白的重折叠 | 第27-29页 |
第三章 抗单增李斯特菌溶血素O 单克隆抗体的制备与鉴定 | 第29-42页 |
·材料 | 第29-31页 |
·质粒与细胞系 | 第29页 |
·实验动物 | 第29页 |
·主要试剂 | 第29页 |
·主要仪器 | 第29页 |
·主要溶液的配置 | 第29-31页 |
·方法与步骤 | 第31-37页 |
·动物免疫 | 第31页 |
·间接ELISA 检测方法的建立 | 第31-32页 |
·细胞融合 | 第32-34页 |
·融合细胞的选择性培养 | 第34页 |
·抗体阳性孔的筛选 | 第34页 |
·阳性孔细胞的克隆化 | 第34-35页 |
·杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第35页 |
·小鼠腹水的制备 | 第35页 |
·单克隆抗体的纯化 | 第35-36页 |
·杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体的特性鉴定 | 第36-37页 |
·结果 | 第37-41页 |
·重折叠LLO 蛋白间接ELISA 检测方法的建立 | 第37-38页 |
·细胞融合与单克隆杂交瘤细胞株的建立 | 第38页 |
·杂交瘤细胞与单克隆抗体特性的鉴定 | 第38-41页 |
·讨论 | 第41-42页 |
第四章 兔抗LLO 多克隆抗体的制备 | 第42-46页 |
·材料 | 第42-43页 |
·试验动物 | 第42页 |
·主要试验材料 | 第42页 |
·主要溶液的配制 | 第42-43页 |
·方法与步骤 | 第43-44页 |
·动物免疫 | 第43页 |
·动物采血 | 第43-44页 |
·抗血清效价的测定及纯化 | 第44页 |
·结果 | 第44-45页 |
·讨论 | 第45-46页 |
第五章 单增李斯特菌溶血素O 双抗体间接夹心ELISA 检测方法的初步建立 | 第46-52页 |
·材料 | 第46-47页 |
·主要试验材料 | 第46页 |
·主要缓冲液的配制 | 第46-47页 |
·方法与步骤 | 第47-49页 |
·双抗体间接夹心ELISA 的操作步骤 | 第47-48页 |
·单克隆抗体与多克隆抗体最适合包被浓度的确定 | 第48页 |
·间接夹心ELISA 工作条件的优化 | 第48-49页 |
·结果 | 第49-50页 |
·单克隆与多克隆抗体最佳工作浓度的确定 | 第49页 |
·间接夹心ELISA 检测方法反应条件的优化 | 第49-50页 |
·讨论 | 第50-52页 |
结论 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-59页 |
致谢 | 第59-60页 |
作者简介 | 第60页 |