| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 选题的背景及意义 | 第12-13页 |
| 1.2 人参皂苷生物合成的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.2.1 人参皂苷生物合成途径 | 第13-16页 |
| 1.2.2 人参皂苷生物合成的关键酶 | 第16-19页 |
| 1.3 酿酒酵母表达系统 | 第19-20页 |
| 1.4 多基因共表达 | 第20-21页 |
| 1.5 合成生物学在代谢工程中的应用 | 第21-22页 |
| 1.6 人参皂苷Rh2 | 第22-23页 |
| 1.7 研究内容及技术路线 | 第23页 |
| 1.7.1 研究内容 | 第23页 |
| 1.7.2 技术路线 | 第23页 |
| 1.8 研究创新点 | 第23-25页 |
| 第2章 人参D12H和UGT-D-3OH-1 基因的克隆 | 第25-40页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第25-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第25-27页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.3.1 人参发根的继代培养 | 第27-28页 |
| 2.3.2 人参发根前期处理及总RNA提取 | 第28页 |
| 2.3.3 人参发根cDNA的合成 | 第28-29页 |
| 2.3.4 人参D12H和UGT-D-3OH-1 基因克隆 | 第29-31页 |
| 2.3.5 克隆载体的重组及转化 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-38页 |
| 2.4.1 引物的设计 | 第32-33页 |
| 2.4.2 人参总RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.4.3 D12H和UGT-D-3OH-1 基因的克隆与回收 | 第34-36页 |
| 2.4.4 D12H和UGT-D-3OH-1 基因克隆载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 多基因共表达工程菌的构建与鉴定 | 第40-60页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料和方法 | 第40-51页 |
| 3.2.1 试剂和引物 | 第40-41页 |
| 3.2.2 培养基和试剂的配制 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.4 酿酒酵母表达载体的构建 | 第43-47页 |
| 3.2.5 酿酒酵母工程菌的构建 | 第47-49页 |
| 3.2.6 YPDDG的诱导表达 | 第49-50页 |
| 3.2.7 YPDDG中代谢产物的检测 | 第50-51页 |
| 3.4 结果与分析 | 第51-58页 |
| 3.4.1 重组载体pESC-D12H阳性克隆的筛选及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.2 共表达载体pESC-D12H-UGT的构建及鉴定 | 第52-53页 |
| 3.4.3 共表达载体pESC-D12H-UGT的测序 | 第53页 |
| 3.4.4 酵母转化子的表型筛选及PCR鉴定 | 第53-55页 |
| 3.4.5 YPDDG中人参皂苷合成关键酶基因的表达鉴定 | 第55-56页 |
| 3.4.6 YPDDG中人参皂苷Rh2的检测 | 第56-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58-59页 |
| 3.6 本章小结 | 第59-60页 |
| 第4章 工程菌YPDDG生长条件的优化 | 第60-66页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第60页 |
| 4.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 4.3.1 工程菌YPDDG生长曲线的绘制 | 第60-61页 |
| 4.3.2 装样量工程菌YPDDG生长的影响 | 第61页 |
| 4.3.3 培养温度对工程菌YPDDG生长的影响 | 第61页 |
| 4.3.4 振荡转速对工程菌YPDDG生长的影响 | 第61页 |
| 4.3.5 pH对工程菌YPDDG生长的影响 | 第61-62页 |
| 4.4 结果与分析 | 第62-65页 |
| 4.4.1 酵母工程菌YPDDG生长曲线的绘制 | 第62页 |
| 4.4.2 装样量对工程菌YPDDG生长的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.3 培养温度对工程菌YPDDG生长的影响 | 第63页 |
| 4.4.4 振荡转速对工程菌YPDDG生长的影响 | 第63-64页 |
| 4.4.5 pH对工程菌YPDDG生长的影响 | 第64-65页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第65-66页 |
| 第5章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66-67页 |
| 5.2 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 作者简介 | 第75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
