| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 植物抗寒性的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 植物冷信号的传递途径 | 第14-16页 |
| 1.1.2 茶树冷诱导基因CsCOR1的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 互作蛋白的研究方法及其进展 | 第17-21页 |
| 1.2.1 酵母双杂交系统(Yeast two hybrid system,Y2H)的构建原理 | 第18-20页 |
| 1.2.2 酵母双杂交系统局限性 | 第20页 |
| 1.2.3 双杂交系统的改进和发展 | 第20-21页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第2章 钓饵载体的构建 | 第22-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 主要溶液的配方 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 CsCOR1基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.2 PCR凝胶产物的回收 | 第24页 |
| 2.2.3 pDONR~(TM)222-CsCOR1重组质粒的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.4 重组质粒的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.5 pDEST32-CsCOR1重组质粒的构建 | 第27页 |
| 2.3 结果 | 第27-29页 |
| 2.3.1 CsCOR1的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 pDONR222-CsCOR1重组子的PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.3.3 pDEST32-CsCOR1的测序结果 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第3章 茶树的酵母双杂交cDNA文库构建 | 第30-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 引物与接头 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 3.2.1 实验原理 | 第30-32页 |
| 3.2.2 茶树总RNA的提取和检测 | 第32-33页 |
| 3.2.3 cDNA的合成 | 第33-36页 |
| 3.2.4 ds cDNA与pDONR222载体的重组连接 | 第36页 |
| 3.2.5 电转化 | 第36-37页 |
| 3.2.6 cDNA初级文库的质量检测 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-40页 |
| 3.3.1 茶树酵母双杂交总RNA的提取和分离 | 第38-39页 |
| 3.3.2 ds cDNA的合成 | 第39页 |
| 3.3.3 cDNA文库的构建及鉴定 | 第39页 |
| 3.3.4 酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第4章 CsCOR1互作蛋白的筛选 | 第42-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 实验菌株和质粒 | 第42页 |
| 4.1.2 主要溶液的配方 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-49页 |
| 4.2.1 酵母感受态细胞的制备和转化 | 第43-44页 |
| 4.2.2 钓饵质粒的自激活验证 | 第44页 |
| 4.2.3 pDEST22-cDNA文库的制备 | 第44-46页 |
| 4.2.4 pDEST22-cDNA文库质粒转化入大肠杆菌DH10B细胞中 | 第46页 |
| 4.2.5 pDEST22-cDNA文库质粒的大量制备 | 第46页 |
| 4.2.6 pDEST22-cDNA和pDEST32-CsCOR1共转化酵母感受态细胞 | 第46页 |
| 4.2.7 阳性克隆的筛选 | 第46-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-56页 |
| 4.3.1 钓饵蛋白自激活检测 | 第49-50页 |
| 4.3.2 酵母双杂阳性克隆的初步筛选 | 第50页 |
| 4.3.3 显色反应结果 | 第50-51页 |
| 4.3.4 候选克隆的测序结果分析 | 第51-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-59页 |
| 第5章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 5.1 结论 | 第59页 |
| 5.2 展望 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读学位期间获得与学位论文相关的科研成果目录 | 第68页 |
