| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 几丁质研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 几丁质的分布 | 第12页 |
| 1.1.2 几丁质的化学结构 | 第12页 |
| 1.1.3 几丁质的化学性质 | 第12-13页 |
| 1.2 几丁质及其衍生物的应用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 应用于食品和环保 | 第13-14页 |
| 1.2.2 应用于农业 | 第14页 |
| 1.2.3 应用于医学 | 第14-15页 |
| 1.2.4 应用于其他领域 | 第15页 |
| 1.3 几丁质及其衍生物的制备 | 第15-17页 |
| 1.3.1 几丁质的提取 | 第15页 |
| 1.3.2 几丁质的降解 | 第15-16页 |
| 1.3.3 壳聚糖的制备 | 第16-17页 |
| 1.4 几丁质酶的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.4.1 几丁质酶的分类 | 第18-19页 |
| 1.4.2 几丁质酶的结构 | 第19页 |
| 1.4.3 来自海洋微生物的几丁质酶的性质 | 第19-20页 |
| 1.4.4 几丁质酶的表达调控 | 第20-21页 |
| 1.5 几丁质酶的应用 | 第21页 |
| 1.5.1 降解几丁质 | 第21页 |
| 1.5.2 抑制病原菌,生物防治 | 第21页 |
| 1.5.4 在医学应用方面 | 第21页 |
| 1.6 海底沉积物样本的来源—北部湾 | 第21-22页 |
| 1.7 本课题的主要内容和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 B.cereus B04的筛选及鉴定 | 第23-32页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 主要试剂及仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.2 其他主要培养基及试剂的配方 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.3.1 几丁质降解菌的初筛 | 第25页 |
| 2.3.2 测定酶比活力进行复筛 | 第25-26页 |
| 2.3.3 菌种的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4 结果分析 | 第27-30页 |
| 2.4.1 几丁质降解菌的初筛 | 第27页 |
| 2.4.2 几丁质降解菌的复筛 | 第27-29页 |
| 2.4.3 菌株的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.5 本章小结与讨论 | 第30-32页 |
| 第3章 发酵条件优化 | 第32-37页 |
| 3.1 引言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.2.1 菌株 | 第32页 |
| 3.2.3 实验所用试剂及仪器 | 第32-33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33页 |
| 3.3.1 优化培养时间 | 第33页 |
| 3.3.2 优化装液量 | 第33页 |
| 3.3.3 优化氮源 | 第33页 |
| 3.3.4 优化胶体几丁质浓度 | 第33页 |
| 3.3.5 优化初始pH | 第33页 |
| 3.4 结果分析 | 第33-36页 |
| 3.4.1 B.cereus B04菌株的最佳收菌时间 | 第33-34页 |
| 3.4.2 B.cereus B04菌株产酶的最佳装液量 | 第34页 |
| 3.4.3 B.cereus B04菌株产酶的最佳氮源 | 第34页 |
| 3.4.4 B.cereus B04菌株产酶的最佳胶体几丁质浓度 | 第34-35页 |
| 3.4.5 B.cereus B04菌株产酶的最佳初始pH | 第35-36页 |
| 3.5 本章小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第4章 Chi36B04的分离、纯化及鉴定 | 第37-48页 |
| 4.1 引言 | 第37-39页 |
| 4.1.1 Bacillus cereus的研究现状 | 第37页 |
| 4.1.2 几丁质酶的纯化策略 | 第37-38页 |
| 4.1.3 纯化蛋白的N端测序 | 第38-39页 |
| 4.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.2.1 主要试剂和仪器 | 第39页 |
| 4.2.2 常用溶液及试剂 | 第39-40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.3.1 B.cereus B04菌株几丁质酶系的分离 | 第40-41页 |
| 4.3.2 几丁质酶的纯化 | 第41-42页 |
| 4.3.3 Chi36B04蛋白的N端氨基酸序列 | 第42-43页 |
| 4.4 结果分析 | 第43-46页 |
| 4.4.1 几丁质珠分离得到的几丁质酶 | 第43页 |
| 4.4.2 几丁质酶的纯化 | 第43-46页 |
| 4.4.3 纯化几丁质酶的鉴定 | 第46页 |
| 4.5 本章小结及讨论 | 第46-48页 |
| 第5章 发酵液及Chi36B04的酶学性质分析 | 第48-54页 |
| 5.1 引言 | 第48页 |
| 5.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 5.2.1 主要试剂和仪器 | 第48页 |
| 5.2.2 常用溶液及试剂 | 第48-49页 |
| 5.3 实验方法 | 第49-50页 |
| 5.3.1 pH对发酵液及Chi36B04活力的影响 | 第49页 |
| 5.3.2 温度对发酵液及Chi36B04活力的影响 | 第49页 |
| 5.3.3 底物浓度对Chi36B04活力的影响 | 第49页 |
| 5.3.4 几丁质酶活力测定的最佳反应时间 | 第49页 |
| 5.3.5 金属离子对Chi36B04活力的影响 | 第49页 |
| 5.3.6 Chi36B04的底物特异性 | 第49-50页 |
| 5.4 结果分析 | 第50-52页 |
| 5.4.1 pH对发酵液及Chi36B04活力的影响 | 第50页 |
| 5.4.2 温度对发酵液及Chi36B04活力的影响 | 第50-51页 |
| 5.4.3 底物浓度对Chi36B04活力的影响 | 第51页 |
| 5.4.4 Chi36B04酶反应的最佳时间 | 第51页 |
| 5.4.5 金属离子对Chi36B04活力的影响 | 第51-52页 |
| 5.4.6 Chi36B04的底物特异性 | 第52页 |
| 5.5 本章小结与讨论 | 第52-54页 |
| 第6章 Chi36804的可溶表达 | 第54-64页 |
| 6.1 引言 | 第54-55页 |
| 6.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 6.2.1 菌株和质粒 | 第55页 |
| 6.2.2 主要的试剂和仪器 | 第55-56页 |
| 6.3 实验方法 | 第56-59页 |
| 6.3.1 构建Chi36B04蛋白的重组质粒 | 第56-58页 |
| 6.3.2 Chi36B04/pET-28a(+)重组蛋白的小量表达 | 第58-59页 |
| 6.3.3 Chi36B04/pET-28a(+)重组蛋白的大量表达及纯化 | 第59页 |
| 6.4 结果分析 | 第59-63页 |
| 6.4.1 Chi36B04蛋白基因的扩增 | 第59-61页 |
| 6.4.2 Chi36B04/pET-28a(+)重组质粒的构建和验证 | 第61-62页 |
| 6.4.3 Chi36B04/pET-28a(+)重组蛋白的小量表达 | 第62页 |
| 6.4.4 Chi36B04/pET-28a(+)重组蛋白的大量表达 | 第62-63页 |
| 6.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第7章 总结与展望 | 第64-66页 |
| 7.1 总结 | 第64页 |
| 7.2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
