| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 1 引言 | 第16-28页 |
| 1.1 TCP转录因子家族的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.1.1 TCP转录因子家族的发现 | 第17页 |
| 1.1.2 TCP转录因子的特点 | 第17-18页 |
| 1.1.3 TCP转录因子参与植物发育 | 第18-19页 |
| 1.1.4 TCP转录因子的其他功能 | 第19-21页 |
| 1.2 CRISRP-Cas9系统的研究进展 | 第21-27页 |
| 1.2.1 CRISPR-CAS9的发现与应用 | 第21-22页 |
| 1.2.2 CRISRP-Cas9系统的结构与原理 | 第22-25页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9系统基因编辑后的鉴定 | 第25页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9系统的优势 | 第25-27页 |
| 1.3 本课题的目的和意义 | 第27-28页 |
| 2 白菜TCP基因家族的鉴定 | 第28-39页 |
| 2.1 材料 | 第28页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 半定量PCR引物 | 第28页 |
| 2.1.3 实验仪器和试剂 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 TCP转录因子家族基因的鉴定和同源进化树构建 | 第28-29页 |
| 2.2.2 利用Circos软件定位基因 | 第29页 |
| 2.2.3 菜心总RNA的提取和质量检测 | 第29-30页 |
| 2.2.4 cDNA第一条链的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.5 半定量PCR检测菜心TCP转录因子的表达 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.3.1 白菜TCP转录因子基因家族的鉴定 | 第32页 |
| 2.3.2 白菜TCP转录因子基因家族进化树的构建与分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 TCP基因家族的染色体定位与共线性关系 | 第33-35页 |
| 2.3.4 白菜TCP基因家族在叶片发育和形态建成中的转录水平 | 第35-37页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 3 菜心不定芽再生体系及遗传转化体系的优化 | 第39-52页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第39页 |
| 3.1.3 实验试剂及配制 | 第39页 |
| 3.1.4 培养基组成及配制 | 第39页 |
| 3.1.5 菜心高频不定芽再生体系所用的优化培养基 | 第39-40页 |
| 3.1.6 根癌农杆菌介导的菜心遗传转化体系的优化培养基 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 菜心遗传转化系统的初步探索 | 第40-43页 |
| 3.2.1.1 种子的消毒处理 | 第40-41页 |
| 3.2.1.2 外植体的获取和培养 | 第41页 |
| 3.2.1.3 不同浓度gelzan含量对于不定芽诱导的影响 | 第41页 |
| 3.2.1.4 不同浓度AgNO_3对菜心不定芽诱导的影响 | 第41页 |
| 3.2.1.5 不同激素组合对菜心不定芽诱导的影响 | 第41-43页 |
| 3.2.3 菜心遗传转化系统的初步探索 | 第43-45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-49页 |
| 3.3.1 菜心不定芽再生体系的建立 | 第45-47页 |
| 3.3.1.1 Gelzan植物凝胶对不定芽诱导的影响 | 第45页 |
| 3.3.1.2 AgNO_3对菜心不定芽诱导的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.1.3 激素浓度对不定芽诱导的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.2 菜心遗传转化体系的建立 | 第47-49页 |
| 3.4 小结 | 第49-52页 |
| 3.4.1 菜心不定芽再生体系的建立 | 第49-51页 |
| 3.4.2 菜心遗传转化系统的初步探索 | 第51-52页 |
| 4 菜心CRISPR-Cas9系统的初步探索 | 第52-63页 |
| 4.1 材料 | 第52-54页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第52页 |
| 4.1.2 质粒和菌株 | 第52-53页 |
| 4.1.3 TCP14基因的sgRNA1和sgRNA2和pAtU6引物的合成 | 第53页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第53页 |
| 4.1.5 实验试剂及配制 | 第53页 |
| 4.1.6 大肠杆菌和农杆菌培养所用的培养基 | 第53-54页 |
| 4.2 方法 | 第54-59页 |
| 4.2.1 设计sgRNA靶标序列 | 第54页 |
| 4.2.2 sgRNA Oligo二聚体的制备 | 第54页 |
| 4.2.3 质粒酶切与产物连接 | 第54-57页 |
| 4.2.4 质粒转化DH5a大肠杆菌感受态 | 第57-58页 |
| 4.2.5 提取重组质粒 | 第58-59页 |
| 4.2.6 重组质粒转化农杆菌(冻融法) | 第59页 |
| 4.2.7 菌液PCR鉴定阳性转化子 | 第59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-62页 |
| 4.3.1 CRISPR-Cas9载体的构建 | 第59-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-63页 |
| 5 总结与讨论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-80页 |
| 附录A 主要试剂 | 第70-72页 |
| 附录B 仪器 | 第72-73页 |
| 附录C 白菜TCP转录因子的信息和分类情况 | 第73-76页 |
| 附录D 本研究所用的引物 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
