| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACTS | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-38页 |
| 1.1 结核病及其防治方法研究进展 | 第20-28页 |
| 1.1.1 结核病的危害 | 第20页 |
| 1.1.2 结核分枝杆菌生命周期 | 第20-22页 |
| 1.1.3 结核分枝杆菌疫苗研究 | 第22-24页 |
| 1.1.4 抗结核药物研究 | 第24-28页 |
| 1.2 结核分枝杆菌与巨噬细胞相互作用 | 第28-35页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌感染与巨噬细胞信号转导 | 第28-31页 |
| 1.2.2 结核分枝杆菌与宿主 microRNA 调控 | 第31-35页 |
| 1.3 抗结核基因研究进展 | 第35-36页 |
| 1.3.1 遗传因素与结核病易感性 | 第35页 |
| 1.3.2 宿主细胞抗结核基因 | 第35-36页 |
| 1.4 Ipr1 基因研究进展 | 第36-37页 |
| 1.4.1 sst1 和 Ipr1 基因的鉴定 | 第36页 |
| 1.4.2 发展趋势与存在的主要问题 | 第36-37页 |
| 1.5 本研究的内容和意义 | 第37-38页 |
| 第二章 Ipr1 蛋白相互作用组研究 | 第38-76页 |
| 2.1 材料与方法 | 第38-48页 |
| 2.1.1 材料 | 第38页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 | 第39页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第39-40页 |
| 2.1.5 细胞培养 | 第40页 |
| 2.1.6 BL21 细菌基因组 DNA 提取 | 第40-41页 |
| 2.1.7 载体构建 | 第41-42页 |
| 2.1.8 细胞转染 | 第42页 |
| 2.1.9 质粒稳定转染巨噬细胞系构建 | 第42-43页 |
| 2.1.10 免疫印迹（western blotting,WB） | 第43-44页 |
| 2.1.11 亲和纯化富集 Ipr1 蛋白复合体 | 第44页 |
| 2.1.12 亲和纯化蛋白样品 SDS-PAGE 电泳 | 第44-45页 |
| 2.1.13 质谱 | 第45页 |
| 2.1.14 Ipr1 相互作用蛋白功能注释 | 第45-46页 |
| 2.1.15 蛋白质相互作用网络构建 | 第46页 |
| 2.1.16 新合成蛋白检测 | 第46页 |
| 2.1.17 免疫荧光染色 | 第46-47页 |
| 2.1.18 结核分枝杆菌培养及巨噬细胞感染 | 第47页 |
| 2.1.19 细胞凋亡检测 | 第47-48页 |
| 2.2 结果 | 第48-72页 |
| 2.2.1 RAW264.7 细胞 Ipr1 表达分析 | 第48-50页 |
| 2.2.2 真核表达载体和慢病毒表达载体构建 | 第50-52页 |
| 2.2.3 体内生物素化 Ipr1 检测 | 第52-54页 |
| 2.2.4 稳定表达生物素化 Ipr1 的巨噬细胞系构建 | 第54页 |
| 2.2.5 生物素化 Ipr1 功能研究 | 第54-56页 |
| 2.2.6 链亲和素介导的亲和纯化分离 Ipr1 蛋白复合物 | 第56-58页 |
| 2.2.7 质谱鉴定 Ipr1 蛋白复合物 | 第58-67页 |
| 2.2.8 Ipr1 相互作用蛋白验证及功能注释 | 第67-69页 |
| 2.2.9 Ipr1 相互作用蛋白网络 | 第69页 |
| 2.2.10 Ipr1 抑制蛋白合成 | 第69-72页 |
| 2.3 讨论 | 第72-75页 |
| 2.4 结论 | 第75-76页 |
| 第三章 Ipr1 对巨噬细胞蛋白编码基因的调控 | 第76-105页 |
| 3.1 材料与方法 | 第76-86页 |
| 3.1.1 材料 | 第76页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第76-77页 |
| 3.1.3 主要仪器与耗材 | 第77-78页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第78-79页 |
| 3.1.5 细胞培养 | 第79页 |
| 3.1.6 载体构建 | 第79页 |
| 3.1.7 质粒稳定转染巨噬细胞系构建 | 第79-80页 |
| 3.1.8 免疫印迹 | 第80-81页 |
| 3.1.9 结核分枝杆菌培养及巨噬细胞感染 | 第81-82页 |
| 3.1.10 RNA 提取 | 第82页 |
| 3.1.11 反转录与定量 PCR | 第82-83页 |
| 3.1.12 RNA-seq(Q)高通量测序及数据分析 | 第83-86页 |
| 3.2 结果 | 第86-100页 |
| 3.2.1 Ipr1 全长及截短体慢病毒载体构建 | 第86-87页 |
| 3.2.2 稳定表达全长 Ipr1 及截短体的巨噬细胞构建与验证 | 第87页 |
| 3.2.3 RNA-seq (Q) 测序评估 | 第87-92页 |
| 3.2.4 差异基因总览 | 第92-94页 |
| 3.2.5 Ipr1 影响巨噬细胞基因表达 | 第94-96页 |
| 3.2.6 结核分枝杆菌感染影响巨噬细胞基因表达 | 第96页 |
| 3.2.7 DEG1 和 DEG2 差异基因比较 | 第96-98页 |
| 3.2.8 DEG2 和 DEG3 差异基因比较 | 第98-99页 |
| 3.2.9 攻毒后 RAW-Ipr1 与 RAW-Control 差异基因分析 | 第99-100页 |
| 3.2.10 差异表达基因验证 | 第100页 |
| 3.3 讨论 | 第100-104页 |
| 3.4 结论 | 第104-105页 |
| 第四章 Ipr1 调控巨噬细胞 miRNA 表达 | 第105-124页 |
| 4.1 材料与方法 | 第105-108页 |
| 4.1.1 Small RNA 测序（Small RNA-seq）及数据分析 | 第105-106页 |
| 4.1.2 miRNA 反转录及 qPCR 验证 | 第106-108页 |
| 4.2 结果 | 第108-120页 |
| 4.2.1 测序小 RNA（sRNA）长度分布及数据质量 | 第108-109页 |
| 4.2.2 sRNA 参考基因组比对结果 | 第109页 |
| 4.2.3 sRNAs 与 Rfam 比对结果 | 第109页 |
| 4.2.4 sRNAs 与 Genbank 数据库比对结果 | 第109-110页 |
| 4.2.5 sRNA 与 mRNA 外显子和内含子比对结果 | 第110页 |
| 4.2.6 sRNA 与已知 miRNA 比对结果 | 第110-111页 |
| 4.2.7 sRNA 分类注释 | 第111-113页 |
| 4.2.8 两样品间已知 miRNA 差异表达分析 | 第113-116页 |
| 4.2.9 差异表达 miRNA 验证 | 第116-118页 |
| 4.2.10 Ipr1 调控巨噬细胞 miRNA 表达 | 第118-120页 |
| 4.3 讨论 | 第120-122页 |
| 4.4 结论 | 第122-124页 |
| 第五章 Ipr1 通过多种机制介导巨噬细胞凋亡 | 第124-148页 |
| 5.1 材料与方法 | 第124-130页 |
| 5.1.1 材料 | 第124页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第124-125页 |
| 5.1.3 主要仪器与耗材 | 第125页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第125-126页 |
| 5.1.5 细胞培养 | 第126页 |
| 5.1.6 RAW264.7 细胞基因组 DNA 提取 | 第126页 |
| 5.1.7 载体构建 | 第126-129页 |
| 5.1.8 细胞转染 | 第129页 |
| 5.1.9 慢病毒感染 RAW264.7 细胞 | 第129-130页 |
| 5.1.10 双荧光素酶报告分析 | 第130页 |
| 5.2 结果 | 第130-143页 |
| 5.2.1 载体构建 | 第130-132页 |
| 5.2.2 双荧光素酶分析验证 miRNA 靶基因 | 第132-134页 |
| 5.2.3 miR-125a 通过作用于 Bmf 3’ UTR 抑制其表达 | 第134-135页 |
| 5.2.4 过表达 Bmf 诱导巨噬细胞凋亡 | 第135-137页 |
| 5.2.5 Ipr1 影响内质网胁迫介导的信号通路 | 第137-139页 |
| 5.2.6 Ipr1 与 Hspa5 相互作用诱导内质网胁迫反应 | 第139-141页 |
| 5.2.7 诱导内质网胁迫是 Ipr1 介导巨噬细胞凋亡的关键途径 | 第141-143页 |
| 5.3 讨论 | 第143-147页 |
| 5.4 结论 | 第147-148页 |
| 全文结论 | 第148-150页 |
| 参考文献 | 第150-170页 |
| 附录 | 第170-178页 |
| 致谢 | 第178-179页 |
| 作者简介 | 第179-180页 |
