| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词及英汉对照 | 第6-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 大肠杆菌表达系统 | 第10页 |
| 1.2 重组蛋白的相关研究 | 第10-11页 |
| 1.3 TEV酶的相关研究 | 第11-13页 |
| 1.4 共价固定化标签的研究 | 第13-15页 |
| 1.5 ACP蛋白和ybbR短肽 | 第15-17页 |
| 1.6 蓝白斑筛选 | 第17-18页 |
| 1.7 TEV酶的活性分析方法 | 第18页 |
| 1.8 实验思路 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要引物 | 第20页 |
| 2.2 实验仪器 | 第20页 |
| 2.3 试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.4 主要试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.4.1 抗生素及诱导物 | 第21页 |
| 2.4.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第21页 |
| 2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂 | 第21-22页 |
| 2.4.4 磷酸钠缓冲溶液配制 | 第22页 |
| 2.4.5 TEV蛋白酶酶切反应缓冲液 | 第22页 |
| 2.5 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.5.1 细菌总DNA的抽提 | 第22-23页 |
| 2.5.2 质粒的抽提 | 第23页 |
| 2.5.3 DNA纯化回收 | 第23-24页 |
| 2.5.4 聚合酶链式反应 | 第24页 |
| 2.5.5 DNA酶切连接 | 第24-25页 |
| 2.5.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 2.5.7 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26-27页 |
| 2.5.8 菌落PCR检测重组子 | 第27-28页 |
| 2.5.9 基因定点突变 | 第28页 |
| 2.5.10 融合蛋白的表达 | 第28页 |
| 2.5.11 目的蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.5.12 Ni-NTA柱纯化 | 第29-30页 |
| 2.5.13 脱盐浓缩 | 第30页 |
| 2.5.14 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-32页 |
| 2.5.15 蛋白浓度的测定 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-50页 |
| 3.1 目的基因克隆和载体的构建 | 第33-40页 |
| 3.1.1 TEV蛋白酶基因的扩增 | 第33-34页 |
| 3.1.2 构建pET28b-his-TEV表达载体 | 第34页 |
| 3.1.3 构建pET28b-MBP-his-TEV表达载体 | 第34-35页 |
| 3.1.4 重组pET28b-MBP-his-TEV的酶切检测 | 第35-36页 |
| 3.1.5 构建pET28b-his-ACP-TEV表达载体 | 第36页 |
| 3.1.6 构建pET28b-MBP-his-ACP-TEV表达载体 | 第36-37页 |
| 3.1.7 重组pET28b-MBP-his-ACP-TEV酶切检测 | 第37页 |
| 3.1.8 构建pET28b-ybbR-his-TEV表达载体 | 第37-38页 |
| 3.1.9 构建pET28b-MBP-ybbR-his-TEV表达载体 | 第38-39页 |
| 3.1.10 重组pET28b-MBP-ybbR-his-TEV的酶切检测 | 第39-40页 |
| 3.1.11 pET30ɑ-his-MBP-BCCP检测 | 第40页 |
| 3.2 目的蛋白表达结果 | 第40-44页 |
| 3.2.1 pET30ɑ-his-MBP-BCCP转化大肠杆菌的表达分析 | 第40-41页 |
| 3.2.2 pET28b-MBP-his-TEV转化大肠杆菌的表达分析 | 第41-42页 |
| 3.2.3 pET28b-MBP-his-ACP-TEV转化大肠杆菌的表达分析 | 第42-43页 |
| 3.2.4 pET28b-MBP-ybbR-his-TEV转化大肠杆菌的表达分析： | 第43-44页 |
| 3.3 蛋白含量的比较分析 | 第44-50页 |
| 3.3.1 初步定性分析TEV、ACP-TEV、ybbR-TEV的酶切活性 | 第45-47页 |
| 3.3.2 TEV、ybbR-TEV、ACP-TEV三者的酶切活性半定量分析 | 第47-50页 |
| 4 对TEV酶酶切活性分析新方法的探索 | 第50-56页 |
| 4.1 构建pBAD24-α | 第50-51页 |
| 4.2 构建pBAD24-his-MBP-α 和pBAD24-his-MBP2-α | 第51-53页 |
| 4.2.1 重组pBAD24-his-MBP-α 和pBAD24-his-MBP2-α 的酶切检测 | 第52-53页 |
| 4.3 pSU18-MBP-his-TEV与pBAD24-his-MBP-α 共转DH5α | 第53-55页 |
| 4.3.1 pET28b-MBP-his-TEV与pBAD24-his-MBP2-α 共转DH5α | 第54-55页 |
| 4.4 蓝白斑显示 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 6 讨论 | 第57-58页 |
| 7 展望 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
