| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩略词 | 第7-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 弧菌及弧菌病 | 第10-12页 |
| 1.1.1 常见弧菌病 | 第10-11页 |
| 1.1.2 溶藻弧菌 | 第11-12页 |
| 1.1.4 哈维氏弧菌 | 第12页 |
| 1.2 双组分调控系统（Two component regulatory systems, TCRS） | 第12-17页 |
| 1.2.1 双组分调控系统KdpDE | 第14-17页 |
| 1.3 疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.1 灭活疫苗 | 第17页 |
| 1.3.2 减毒活疫苗 | 第17-18页 |
| 1.3.3 亚单位疫苗 | 第18页 |
| 1.3.4 核酸疫苗 | 第18页 |
| 1.3.5 合成肽疫苗 | 第18页 |
| 1.3.6 鱼类疫苗接种方法 | 第18页 |
| 1.4 斑马鱼在鱼类疫苗研究中的应用 | 第18-20页 |
| 1.5 技术路线 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的以及意义 | 第21-22页 |
| 2 溶藻弧菌kdpD和kdpE基因的克隆及序列分析 | 第22-29页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂及载体 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23页 |
| 2.2.1 V. alginolyticus HY9901株细菌总DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.2 kdpD和kdpE基因的克隆 | 第23页 |
| 2.2.3 目的片段的连接和测序 | 第23页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.3 结果 | 第23-28页 |
| 2.3.1 kdpD和kdpE基因的全长克隆 | 第23-24页 |
| 2.3.2 理化性质 | 第24页 |
| 2.3.3 序列分析 | 第24-26页 |
| 2.3.4 进化分析 | 第26页 |
| 2.3.5 功能结构域和二级结构的预测 | 第26-27页 |
| 2.3.6 保守功能域三维结构 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 3 突变株ΔkdpDE、ΔkdpD和ΔkdpE的构建 | 第29-35页 |
| 3.1 材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和引物 | 第29-30页 |
| 3.1.2 试剂及仪器 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 敲除突变株ΔkdpDE、ΔkdpD和ΔkdpE的构建 | 第30-31页 |
| 3.3 结果 | 第31-33页 |
| 3.3.1 敲除突变株△kdpD的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.2 敲除突变株ΔkdpE和ΔkdpDE的构建 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-35页 |
| 4 生物学表型特征研究 | 第35-42页 |
| 4.1 实验材料 | 第35页 |
| 4.1.1 菌株 | 第35页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第35页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 4.2 方法 | 第35-37页 |
| 4.2.1 突变株的遗传稳定性检测 | 第35-36页 |
| 4.2.2 细菌的生长速率比较 | 第36页 |
| 4.2.3 胞外蛋白酶活性检测 | 第36页 |
| 4.2.4 细菌泳动实验 | 第36页 |
| 4.2.5 生物被膜形成能力检测 | 第36页 |
| 4.2.6 半数致死率（LD50）检测 | 第36页 |
| 4.2.7 统计学处理 | 第36-37页 |
| 4.3 结果 | 第37-40页 |
| 4.3.1 突变株的遗传稳定性 | 第37-38页 |
| 4.3.2 细菌的生长速率比较 | 第38页 |
| 4.3.3 泳动性实验 | 第38页 |
| 4.3.4 生物被膜形成能力检测 | 第38-39页 |
| 4.3.5 半数致死量测定LD50 | 第39-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 突变株在水体和鱼体中的存活能力检测及其免疫保护效果分析 | 第42-50页 |
| 5.1 实验材料 | 第42页 |
| 5.1.1 菌株、质粒和实验鱼 | 第42页 |
| 5.1.2 实验仪器与试剂 | 第42页 |
| 5.2 方法 | 第42-43页 |
| 5.2.1 突变株在水体中的存活能力检测 | 第42页 |
| 5.2.2 突变株在鱼体内的存活能力检测 | 第42-43页 |
| 5.2.3 菌液的制备与接种 | 第43页 |
| 5.2.4 免疫保护率的测定 | 第43页 |
| 5.2.5 统计学处理 | 第43页 |
| 5.3 结果 | 第43-48页 |
| 5.3.1 突变株在水体中的存活能力检测 | 第43-44页 |
| 5.3.2 突变株在鱼体内的存活能力检测 | 第44-45页 |
| 5.3.3 免疫保护率 | 第45-48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 6.1 溶藻弧菌双组分调控系统KdpDE基因的克隆和生物信息学分析 | 第50页 |
| 6.2 无标记基因框内敲除突变株的构建 | 第50页 |
| 6.3 突变株△kdpDE、△kdpD和△kdpE的生物学表型特征研究 | 第50页 |
| 6.4 突变株在水体和鱼体中的存活能力检测及其免疫保护效果分析 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 导师简介 | 第62页 |
