| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 前言 | 第8-12页 |
| 1. SPINK6的背景介绍 | 第8-11页 |
| 1.1 SPINK6的核酸序列分析 | 第9-10页 |
| 1.2 SPINK6的结构域分析 | 第10-11页 |
| 2. pEGFP-N1载体介绍 | 第11-12页 |
| 材料与方法 | 第12-26页 |
| 1. 材料 | 第12-16页 |
| 1.1 菌种与质粒 | 第12页 |
| 1.1.1 真核细胞表达载体pEGFP-N1 | 第12页 |
| 1.1.2 大肠杆菌DH5α | 第12页 |
| 1.2 酶、主要试剂和仪器 | 第12-14页 |
| 1.2.1 酶和主要购买试剂 | 第12-13页 |
| 1.2.2 自配试剂 | 第13页 |
| 1.2.3 仪器 | 第13-14页 |
| 1.3 细胞、培养基及培养条件 | 第14-16页 |
| 1.3.1 人肝癌细胞QGY-7703 | 第14页 |
| 1.3.2 人前列腺癌细胞DU 145 | 第14页 |
| 1.3.3 人卵巢癌细胞SK-OV-3 | 第14页 |
| 1.3.4 人肝细胞QSG-7701 | 第14-15页 |
| 1.3.5 人高转移肺癌细胞95-D | 第15页 |
| 1.3.6 人宫颈癌细胞HeLa | 第15页 |
| 1.3.7 人乳腺癌细胞MCF-7 | 第15页 |
| 1.3.8 人胃腺癌细胞SGC-7901 | 第15页 |
| 1.3.9 人胃癌细胞(未分化)HGC-27 | 第15页 |
| 1.3.10 人整合SV40基因的乳腺上皮细胞HBL-100 | 第15-16页 |
| 1.3.11 人乳腺癌细胞MDA-MB-231 | 第16页 |
| 1.3.12 人乳腺癌细胞MDA-MB-453 | 第16页 |
| 1.3.13 人乳腺癌细胞MDA-MB-468 | 第16页 |
| 1.3.14 人肝癌细胞Hep G2 | 第16页 |
| 2. 方法 | 第16-26页 |
| 2.1 SPINK6在不同细胞系中表达水平的检测 | 第16-19页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第17页 |
| 2.1.2 细胞传代培养 | 第17页 |
| 2.1.3 细胞冻存 | 第17页 |
| 2.1.4 总RNA的抽提 | 第17页 |
| 2.1.5 RNA反转录成cDNA | 第17-18页 |
| 2.1.6 Realtime-PCR | 第18-19页 |
| 2.2 免疫荧光 | 第19页 |
| 2.2.1 爬片细胞直接免疫荧光染色 | 第19页 |
| 2.3 质粒pEGFP-N1-SPINK6的构建与鉴定 | 第19-24页 |
| 2.3.1 质粒抽提 | 第19页 |
| 2.3.2 SPINK6片段的获得 | 第19-20页 |
| 2.3.3 双酶切 | 第20-21页 |
| 2.3.4 胶回收 | 第21页 |
| 2.3.5 连接 | 第21-22页 |
| 2.3.6 制备感受态、菌种保存和CaCl_2法转化 | 第22页 |
| 2.3.7 pEGFP-N1-SPINK6质粒的鉴定 | 第22-24页 |
| 2.4 SPINK6在细胞中的定位 | 第24-26页 |
| 2.4.1 细胞转染 | 第24页 |
| 2.4.2 内质网的荧光标记 | 第24页 |
| 2.4.3 溶酶体的荧光标记 | 第24-25页 |
| 2.4.4 细胞膜的荧光标记 | 第25-26页 |
| 结果 | 第26-45页 |
| 1. SPINK6在不同细胞系中的表达 | 第26-28页 |
| 2. SPINK6在细胞中的定位 | 第28-45页 |
| 2.1 天然状态SPINK6蛋白在细胞中定位 | 第28-29页 |
| 2.2 pEGFP-N1-SPINK6载体构建 | 第29-33页 |
| 2.2.1 pEGFP-N1-SPINK6的PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| 2.2.2 pEGFP-N1-SPINK6的单酶切及双酶切结果 | 第30-31页 |
| 2.2.3 pEGFP-N1-SPINK6的测序结果 | 第31-33页 |
| 2.3 SPINK6在细胞中的定位 | 第33-45页 |
| 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 论文发表情况 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
