中文摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-8页 |
缩略词表 | 第12-14页 |
引言 | 第14-16页 |
一 材料与仪器 | 第16-19页 |
1 细胞株 | 第16页 |
2 供试药物 | 第16-17页 |
3 试剂及耗材 | 第17-18页 |
4 主要实验仪器 | 第18-19页 |
二 所需溶液的配置 | 第19-22页 |
1 药物溶液的配置 | 第19页 |
2 细胞培养所用溶液的配置 | 第19-20页 |
2.1 含 10%胎牛血清的DMEM培养基 | 第19页 |
2.2 PBS缓冲溶液 | 第19页 |
2.3 0.25%的胰酶消化液 | 第19-20页 |
2.4 MTT溶液 | 第20页 |
2.5 台盼蓝染液 | 第20页 |
2.6 细胞冻存液 | 第20页 |
3 Western blot实验所需溶液的配置 | 第20-22页 |
3.1 电泳缓冲液 | 第20页 |
3.2 电转缓冲液 | 第20页 |
3.3 SDS loading buffer上样缓冲液(5×) | 第20-21页 |
3.4 TBST缓冲液 | 第21页 |
3.5 封闭液 | 第21页 |
3.6 10% 过硫酸铵 | 第21-22页 |
三 实验方法 | 第22-32页 |
1 细胞培养 | 第22-23页 |
1.1 细胞的复苏 | 第22页 |
1.2 细胞的传代 | 第22页 |
1.3 细胞的冻存 | 第22-23页 |
1.4 单细胞悬液制备和细胞计数 | 第23页 |
2 检测方法 | 第23-32页 |
2.1 MTT法检测S-5 对Huh-7 细胞增殖的影响 | 第23-24页 |
2.2 流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)检测S-5 对Huh-7 细胞凋亡率的影响 | 第24-25页 |
2.3 吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双荧光染色法检测细胞凋亡形态 | 第25-26页 |
2.4 透射电镜观察Huh-7 细胞形态 | 第26页 |
2.5 利用荧光探针JC-1 检测线粒体膜电位的改变 | 第26-27页 |
2.6 Western blot检测S-5 对Huh-7 细胞凋亡通路中相关蛋白表达的影响 | 第27-32页 |
2.6.1 Huh-7 细胞总蛋白的提取 | 第27-28页 |
2.6.2 蛋白浓度的定量测定 | 第28页 |
2.6.3 聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第28-29页 |
2.6.4 转膜 | 第29-30页 |
2.6.5 染色 | 第30页 |
2.6.6 封闭 | 第30页 |
2.6.7 孵一抗 | 第30页 |
2.6.8 孵二抗 | 第30页 |
2.6.9 ECL化学发光显色 | 第30页 |
2.6.10 条带分析 | 第30-31页 |
2.6.11 统计分析 | 第31-32页 |
四 结果 | 第32-39页 |
1 S-5 对Huh-7 细胞增殖的影响 | 第32-34页 |
2 S-5 对Huh-7 细胞凋亡的影响 | 第34-36页 |
3 S-5 对线粒体膜电位的影响 | 第36-37页 |
4 S-5 对 Huh-7 细胞凋亡通路中相关蛋白表达的影响 | 第37-39页 |
五 讨论 | 第39-43页 |
六 结论 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-46页 |
综述 | 第46-65页 |
参考文献 | 第59-65页 |
个人简介 | 第65-66页 |
致谢 | 第66页 |