| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-19页 |
| 1 脂肪酶的研究进展 | 第10-17页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第10-11页 |
| ·脂肪酶结构及催化机理 | 第11-14页 |
| ·脂肪酶的生产及应用 | 第14-17页 |
| 2 寄生曲霉脂肪酶研究现状 | 第17-18页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 寄生曲霉脂肪酶的全基因合成 | 第19-33页 |
| 1 材料 | 第19-21页 |
| ·菌种与载体 | 第19页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第19页 |
| ·培养基的配制 | 第19-20页 |
| ·缓冲液的配制 | 第20页 |
| ·常用仪器 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-28页 |
| ·试验流程 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21-23页 |
| ·PCR扩增目的基因片段 | 第23-24页 |
| ·T7 核酸内切酶I处理错配问题 | 第24-25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·PCR产物目的基因片段的回收 | 第25页 |
| ·PCR扩增基因片段双酶切及载体构建 | 第25-26页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞制备 | 第26页 |
| ·重组质粒的大肠杆菌转化 | 第26-27页 |
| ·重组子单克隆筛选鉴定 | 第27页 |
| ·载体pFL-B13cl-lip AP的构建 | 第27-28页 |
| 3 结果与讨论 | 第28-32页 |
| ·lipAP基因的人工合成 | 第28-29页 |
| ·重组子单克隆筛选鉴定 | 第29-32页 |
| 4 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 脂肪酶LIPASE AP在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第33-49页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·菌种和载体 | 第33页 |
| ·主要生化试剂 | 第33页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第33-35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-39页 |
| ·重组质粒的表达宿主转化 | 第35页 |
| ·工程菌表达条件优化 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第36页 |
| ·Western Blot印迹杂交 | 第36-37页 |
| ·包涵体制备及变复性 | 第37-38页 |
| ·透析袋处理 | 第38页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·融合蛋白的酶切 | 第38-39页 |
| ·比酶活测定 | 第39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-48页 |
| ·工程菌的表达优化 | 第39-42页 |
| ·包涵体变复性 | 第42-44页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的酶切 | 第45-46页 |
| ·比酶活测定 | 第46-48页 |
| 4 本章小节 | 第48-49页 |
| 第四章 寄生曲霉脂肪酶信息学分析 | 第49-61页 |
| 1 材料与方法 | 第49-52页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| 2 结果与讨论 | 第52-60页 |
| ·Lipase AP 蛋白的物理化学性质及跨膜结构域分析 | 第52-53页 |
| ·Lipase AP的亚细胞定位及信号肽预测 | 第53-54页 |
| ·Lipase AP蛋白质二级结构分析 | 第54-56页 |
| ·Lipase AP系统发育进化分析 | 第56-59页 |
| ·Lipase AP三维结构的预测 | 第59-60页 |
| 3 本章小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 1 研究结论及创新点 | 第61页 |
| 2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附件 | 第70页 |