| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 研究综述 | 第13-35页 |
| 1 Rab蛋白概述 | 第13-19页 |
| 1.1 Rab蛋白的结构特点和循环过程 | 第13-14页 |
| 1.2 Rab蛋白的调控因子 | 第14-15页 |
| 1.2.1 GEF | 第14-15页 |
| 1.2.2 GAP | 第15页 |
| 1.3 Rab蛋白的效应因子及其功能 | 第15-17页 |
| 1.3.1 分子马达：肌球蛋白、肌动蛋白和微管马达 | 第15-16页 |
| 1.3.2 粘附因子 | 第16-17页 |
| 1.3.3 SNARE和SM蛋白 | 第17页 |
| 1.4 Rab蛋白的功能多样性 | 第17-18页 |
| 1.4.1 胞吐作用 | 第17页 |
| 1.4.2 胞吞作用 | 第17页 |
| 1.4.3 自噬过程 | 第17-18页 |
| 1.4.4 信号传导 | 第18页 |
| 1.5 Rab蛋白与疾病 | 第18-19页 |
| 2 Rab5亚家族蛋白 | 第19-25页 |
| 2.1 Rab5 | 第19-23页 |
| 2.1.1 Rab5亚型 | 第19页 |
| 2.1.2 Rab5的结构 | 第19-20页 |
| 2.1.3 Rab5的调控因子 | 第20-23页 |
| 2.1.3.1 Rab5的GEF蛋白 | 第20-21页 |
| 2.1.3.2 Rab5的GAP蛋白 | 第21页 |
| 2.1.3.3 Rab5的效应因子 | 第21-23页 |
| 2.1.4 Rab5在信号转导过程中发挥作用 | 第23页 |
| 2.1.5 Rab5参与有丝分裂和无丝分裂的过程 | 第23页 |
| 2.2 Rab21 | 第23-24页 |
| 2.3 Rab22 | 第24-25页 |
| 2.4 总结 | 第25页 |
| 3 植物和真菌中Rab5的研究概况 | 第25-26页 |
| 4 真核生物中Rab蛋白的进化 | 第26-34页 |
| 4.1 真核生物中Rab蛋白的丢失 | 第27-28页 |
| 4.2 真核生物中Rab蛋白的扩增 | 第28-32页 |
| 4.2.1 Group Ⅰ：Rab1,Rab8,Rab18 | 第28-29页 |
| 4.2.2 Group Ⅱ：Rab5,Rab21,Rab22,Rab24 and RabX1 | 第29页 |
| 4.2.3 Group Ⅲ：Rab7,Rab23,Rab29,Rab32 and Rab7L1 | 第29-30页 |
| 4.2.4 Group Ⅳ：Rab2,Rab4,Rab11 and Rab14 | 第30页 |
| 4.2.5 Group Ⅴ：Rab6 | 第30页 |
| 4.2.6 Group Ⅳ：Rab28 and RabL4 | 第30-32页 |
| 4.3 特定的Rab蛋白家族扩增的原因 | 第32-34页 |
| 5 研究Rab5蛋白在稻瘟病菌和哺乳动物中进化关系的意义 | 第34-35页 |
| 第二章 稻瘟病菌中Rab5蛋白的定位和生化功能分析 | 第35-79页 |
| 1 材料和方法 | 第35-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 1.1.1 供试菌株、质粒和细胞 | 第36页 |
| 1.1.2 供试培养基和细胞培养液 | 第36页 |
| 1.1.2.1 细菌培养基 | 第36页 |
| 1.1.2.2 稻瘟病菌生长培养基 | 第36页 |
| 1.1.2.3 细胞培养液 | 第36页 |
| 1.1.3 生化试剂 | 第36-37页 |
| 1.2 实验方法 | 第37-44页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌中假定MoRabs的氨基酸序列的获得及其克隆 | 第37页 |
| 1.2.2 常规的分子生物学操作 | 第37页 |
| 1.2.3 重组质粒的构建 | 第37-39页 |
| 1.2.3.1 共定位重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| 1.2.3.2 蛋白互作表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 1.2.3.3 细菌表达载体的克隆 | 第39页 |
| 1.2.3.4 病毒表达载体的克隆 | 第39页 |
| 1.2.4 细胞的培养和转染、细胞系的建立 | 第39-40页 |
| 1.2.4.1 细胞的培养和传代 | 第39页 |
| 1.2.4.2 细胞的转染 | 第39-40页 |
| 1.2.4.3 细胞系的建立 | 第40页 |
| 1.2.5 重组质粒的表达与检测 | 第40-41页 |
| 1.2.6 GST pull-down实验 | 第41-42页 |
| 1.2.6.1 融合蛋白的纯化 | 第41页 |
| 1.2.6.2 重组蛋白的准备 | 第41页 |
| 1.2.6.3 相互作用的验证 | 第41-42页 |
| 1.2.7 GTP的水解 | 第42页 |
| 1.2.8 MoRab5A和MoRab5B的定位以及与hRabs的共定位观察 | 第42页 |
| 1.2.9 亚细胞组分的分离 | 第42-43页 |
| 1.2.10 辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)吸收实验 | 第43页 |
| 1.2.10.1 蛋白的表达 | 第43页 |
| 1.2.10.2 HRP的吸收 | 第43页 |
| 1.2.11 用3,3'-二氨基联苯胺对内吞的HRP进行染色 | 第43-44页 |
| 1.2.12 神经轴突生长和分化实验 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-74页 |
| 2.1 稻瘟病菌中MoRabs与哺乳动物中的hRabs在BHK-21和PC12细胞中的定位 | 第44-50页 |
| 2.1.1 循环回收和外排Rab蛋白MoRab8、MoRab11和MoRab1在细胞内的定位 | 第45-48页 |
| 2.1.2 MoRab5A、MoRab5B和MoYpt7在细胞内的定位 | 第48-50页 |
| 2.2 MoRab5A和MoRab5B与hRab5的氨基酸序列比对及分析 | 第50-51页 |
| 2.3 稻瘟病菌MoRab5A和MoRab5B重组质粒的构建和表达 | 第51-53页 |
| 2.4 MoRab5A和MoRab5B与Rab5的效应因子Rabaptin-5、Rabenosyn-5和EEA1的互作验证 | 第53-59页 |
| 2.5 MoRab5A和MoRab5B内源GTP酶活性的检测 | 第59-61页 |
| 2.6 MoRabSA表现出不同的效应因子结合特点和GTP酶活性的关键位点的鉴定 | 第61-67页 |
| 2.7 MoRab5A和MoRab5B在细胞膜和细胞质中的分布 | 第67-68页 |
| 2.8 MoRab5A和MoRab5B在内吞过程中的作用 | 第68-71页 |
| 2.9 HRP在细胞内的分布 | 第71页 |
| 2.10 MoRabSA和MoRab5B在NGF诱导的神经突触生长和细胞分化过程中的作用 | 第71-74页 |
| 3 讨论 | 第74-75页 |
| 4 总结与展望 | 第75-77页 |
| 5 研究的创新点 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-91页 |
| 附录1. 稻瘟病菌MoYpt7互作蛋白的初步筛选 | 第91-102页 |
| 附录2. 本文中使用的引物 | 第102-104页 |
| 附录3. 本文中使用的载体 | 第104-109页 |
| 附录4. 攻读博士学位期间发表的文章 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
