| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 植物种胚发生概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 兰科植物的种胚发育特征 | 第13页 |
| 1.1.2 铁皮石斛原球茎形态发生 | 第13-15页 |
| 1.2 内参基因 | 第15-17页 |
| 1.2.1 内参基因概念 | 第15页 |
| 1.2.2 传统内参基因 | 第15页 |
| 1.2.3 新型内参基因 | 第15-16页 |
| 1.2.4 内参基因筛选及稳定性评价方法 | 第16-17页 |
| 1.3 LEA基因 | 第17-19页 |
| 1.3.1 LEA基因发现起源 | 第17页 |
| 1.3.2 LEA基因种类及特征 | 第17-18页 |
| 1.3.3 LEA在物种进化中的关系 | 第18-19页 |
| 1.3.4 LEA的生物学功能 | 第19页 |
| 1.4 本论文研究意义 | 第19-21页 |
| 第2章 铁皮石斛原球茎形态发生 | 第21-27页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-22页 |
| 2.1.1 培养基的配置及接种 | 第21-22页 |
| 2.1.2 扫描电镜样品制备 | 第22页 |
| 2.1.3 原球茎不同时期材料的收集 | 第22页 |
| 2.2 结果与分析 | 第22-25页 |
| 2.2.1 原球茎不同发育时期形态特征 | 第22-24页 |
| 2.2.2 种子及原球茎扫描电镜观察 | 第24页 |
| 2.2.3 原球茎不同发育时期核酸含量分析 | 第24-25页 |
| 2.3 讨论 | 第25-27页 |
| 第3章 铁皮石斛原球茎时期内参基因的筛选及评价 | 第27-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-34页 |
| 3.1.1 植物材料的选取及处理 | 第27页 |
| 3.1.2 总RNA的提取及cDNA合成 | 第27-29页 |
| 3.1.3 测试内参基因的选取及克隆 | 第29-31页 |
| 3.1.4 RT-qPCR引物设计及扩增 | 第31-33页 |
| 3.1.5 内参基因表达稳定性评价及最适内参基因数目的选取 | 第33-34页 |
| 3.1.6 原球茎发育阶段和温度胁迫下最稳定内参基因的验证 | 第34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-52页 |
| 3.2.1 内参基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.2 引物扩增特异性及扩增效率 | 第35-40页 |
| 3.2.3 候选内参基因的选取及表达谱分析 | 第40-42页 |
| 3.2.4 候选内参基因的表达稳定性评价 | 第42-47页 |
| 3.2.5 最合适内参基因的选取 | 第47-49页 |
| 3.2.6 传统管家基因表达稳定性验证 | 第49-50页 |
| 3.2.7 原球茎发育阶段和温度胁迫下最优内参基因的验证 | 第50-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-53页 |
| 第4章 铁皮石斛全基因组LEA基因的鉴定及分析 | 第53-78页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-57页 |
| 4.1.1 植物材料处理 | 第53页 |
| 4.1.2 铁皮石斛基因组数据的获取及本地数据库的构建 | 第53页 |
| 4.1.3 模式物种LEA家族成员的获取及本地blast比对 | 第53-54页 |
| 4.1.4 HMMER鉴定LEA家族成员基因 | 第54页 |
| 4.1.5 LEA结构域、基因结构及生化特征分析 | 第54页 |
| 4.1.6 LEA定量PCR引物设计 | 第54-56页 |
| 4.1.7 LEA定量PCR扩增 | 第56-57页 |
| 4.2 结果与分析 | 第57-76页 |
| 4.2.1 铁皮石斛RNA提取及cDNA合成 | 第57页 |
| 4.2.2 LEA家族成员的鉴定与分类 | 第57-62页 |
| 4.2.3 LEA基因结构和蛋白基序特征分析 | 第62-64页 |
| 4.2.4 LEA蛋白序列生化特征分析 | 第64-68页 |
| 4.2.5 LEA RT-qPCR引物特异性验证 | 第68页 |
| 4.2.6 LEA基因原球茎中表达模式分析 | 第68-72页 |
| 4.2.7 LEA基因的胁迫响应表达模式分析 | 第72-76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-78页 |
| 结论 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 附录1 | 第89-90页 |
| 附录2 | 第90-92页 |
| 附录3 | 第92-95页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果 | 第95页 |
