| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-30页 |
| 1.1 国内外研究现状 | 第14-27页 |
| 1.1.1 肝细胞癌的概况 | 第14-15页 |
| 1.1.2 转录因子Nrf1研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1.3 Wnt/β-Catenin信号通路与肝癌的侵袭和转移 | 第20-25页 |
| 1.1.4 O-GlcNAc修饰研究概况 | 第25-27页 |
| 1.2 课题的主要研究内容 | 第27-28页 |
| 1.3 本文创新点 | 第28-30页 |
| 2 敲减hNrf1/TCF11对肝癌生物学行为的影响 | 第30-54页 |
| 2.1 材料 | 第30-33页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第30页 |
| 2.1.2 慢病毒载体 | 第30页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第30-33页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-43页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第33-34页 |
| 2.2.2 慢病毒包装及转导 | 第34-39页 |
| 2.2.3 Western Blot | 第39-41页 |
| 2.2.4 MTT法绘制细胞生长曲线 | 第41页 |
| 2.2.5 克隆形成实验 | 第41页 |
| 2.2.6 流式细胞术检测细胞周期 | 第41-42页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第42页 |
| 2.2.8 细胞体外迁移实验（细胞划痕实验） | 第42页 |
| 2.2.9 细胞侵袭实验 | 第42-43页 |
| 2.3 实验结果 | 第43-51页 |
| 2.3.1 稳定敲减hNrf1/TCF11的HepG2、MHCC97H、MHCC97L肝癌细胞系的建立 | 第43-46页 |
| 2.3.2 稳定敲减hNrf1/TCF1对肝癌细胞系增殖的影响 | 第46-49页 |
| 2.3.3 敲减Nrf1对肝癌细胞迁移及侵袭力的作用 | 第49-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-54页 |
| 3 敲减hNrf1/TCF11对肝癌细胞侵袭影响的机制 | 第54-70页 |
| 3.1 材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 主要材料 | 第54页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第54-56页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-60页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第56页 |
| 3.2.2 数字基因表达谱测序 | 第56-57页 |
| 3.2.3 细胞总RNA提取 | 第57页 |
| 3.2.4 反转录 | 第57页 |
| 3.2.5 qPCR实验 | 第57页 |
| 3.2.6 荧光素酶报告基因试验 | 第57页 |
| 3.2.7 Western-blot实验 | 第57页 |
| 3.2.8 放线菌酮追踪实验 | 第57页 |
| 3.2.9 泛素化实验 | 第57-58页 |
| 3.2.10 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提 | 第58-59页 |
| 3.2.11 裸鼠尾静脉注射肺部转移模型建立 | 第59页 |
| 3.2.12 SABC法免疫组织化学 | 第59-60页 |
| 3.3 实验结果 | 第60-67页 |
| 3.3.1 敲减hNrf1/TCF11能激活b-Catenin通路 | 第60-62页 |
| 3.3.2 敲减hNrf1能增加b-Catenin的核累积 | 第62-65页 |
| 3.3.3 敲减hNrf1/TCF11对裸鼠尾静脉荷瘤肺部转移的影响 | 第65-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-70页 |
| 4 O-Glc NAc修饰对Nrf1的影响及其在肝癌发生中的作用 | 第70-88页 |
| 4.1 材料 | 第70-72页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第70页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第70-72页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第72页 |
| 4.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第72页 |
| 4.2.2 细胞总RNA提取 | 第72页 |
| 4.2.3 反转录 | 第72页 |
| 4.2.4 Real-time PCR实验 | 第72页 |
| 4.2.5 Western-blot实验 | 第72页 |
| 4.2.6 GST-Pull-Down实验 | 第72-73页 |
| 4.2.7 荧光素酶报告基因试验 | 第73页 |
| 4.2.8 免疫共沉淀及泛素化实验 | 第73页 |
| 4.2.9 放线菌酮追踪实验 | 第73-74页 |
| 4.3 实实验结果 | 第74-85页 |
| 4.3.1 细胞内O-GlcNAc状态能影响hNrf1/TCF11的丰度 | 第74-75页 |
| 4.3.2 OGT与Nrf1在体外、细胞内均能相互作用 | 第75-77页 |
| 4.3.3 敲减OGT能增加Nrf1及其靶基因的表达 | 第77-79页 |
| 4.3.4 过表达OGT能减少Nrf1的表达并降低其转录活性 | 第79-81页 |
| 4.3.5 O-GlcNAc能影响Nrf1的泛素化降解 | 第81-83页 |
| 4.3.6 O-GlcNAc可能修饰Nrf1的区域 | 第83-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-88页 |
| 5 主要结论与后续研究 | 第88-90页 |
| 5.1 主要结论 | 第88页 |
| 5.2 后续研究 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-108页 |
| 附录 | 第108-109页 |
| A 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第108页 |
| B 作者在攻读博士学位期间参加的科研项目 | 第108-109页 |
| C 实时定量PCR引物序列表 | 第109页 |
