| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| 1.1 体外肝代谢模型的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2 药物代谢酶P450介导药物性肝损伤的研究概述 | 第17-19页 |
| 1.3 转座子研究概述 | 第19-22页 |
| 1.4 本课题研究思路 | 第22-23页 |
| 第二章 PiggyBac介导CYP3A4稳定表达HepG2细胞系的建立及鉴定 | 第23-44页 |
| 2.1 实验仪器与材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.1.2 菌株、细胞株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.4 相关溶液和试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 无内毒素重组质粒制备 | 第26-27页 |
| 2.2.2 HepG2细胞培养及转染 | 第27-28页 |
| 2.2.3 转染细胞单克隆化 | 第28-29页 |
| 2.2.4 单克隆细胞系的转录水平鉴定 | 第29-32页 |
| 2.2.5 单克隆细胞的蛋白表达水平鉴定 | 第32-34页 |
| 2.2.6 单克隆细胞对睾酮的代谢活性鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-41页 |
| 2.3.1 无内毒素重组质粒制备 | 第36页 |
| 2.3.2 细胞转染及单克隆化 | 第36-38页 |
| 2.3.3 单克隆细胞的转录水平鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.4 单克隆细胞的蛋白表达水平鉴定 | 第39页 |
| 2.3.5 经典底物的代谢活性分析 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第41-44页 |
| 第三章 HepG/PB3A4.10 细胞系的CYP3A4基因拷贝数及长期稳定表达分析 | 第44-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 3.2.1 CYP3A4的基因拷贝数测定 | 第45-46页 |
| 3.2.2 CYP3A4表达的长期稳定表达检测 | 第46-47页 |
| 3.2.3 统计学分析 | 第47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-50页 |
| 3.3.1 HepG/PB3A4.10 细胞的CYP3A4基因拷贝数测定 | 第47页 |
| 3.3.2 不同代数HepG/PB3A4.10 细胞的CYP3A4 mRNA表达水平 | 第47-49页 |
| 3.3.3 不同代数HepG/PB3A4.10 细胞的CYP3A4蛋白表达水平 | 第49页 |
| 3.3.4 不同代数HepG/PB3A4.10 细胞的CYP3A4代谢活性 | 第49-50页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 基于HepG/PB3A4.10 细胞系的体外药物代谢毒性评估体系 | 第53-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第54页 |
| 4.1.2 相关溶液配制 | 第54-55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 4.2.1 MTT毒性试验 | 第55-56页 |
| 4.2.2 统计学分析 | 第56页 |
| 4.3 实验结果 | 第56-57页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第57-60页 |
| 结论与展望 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 附录 不同代数HepG/PB3A4.10 细胞的红色荧光表达情况 | 第71-72页 |
| 攻读博士/硕士学位期间取得的研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附件 | 第74页 |
