| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 脯氨酰内肽酶的简述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 脯氨酰内肽酶的性质 | 第11-12页 |
| 1.1.2 脯氨酰内肽酶的催化反应原理 | 第12页 |
| 1.1.3 脯氨酰内肽酶的应用和研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2 黑曲霉作为表达宿主体系的优点 | 第14-17页 |
| 1.3 本论文主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 黑曲霉宿主菌遗传背景的改造 | 第18-57页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第18-23页 |
| 2.2.1 主要实验材料 | 第18-20页 |
| 2.2.2 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第21页 |
| 2.2.4 引物序列 | 第21-23页 |
| 2.3 多拷贝淀粉酶的敲除实验方法 | 第23-40页 |
| 2.3.1 酸性淀粉酶aamA基因的敲除 | 第23-32页 |
| 2.3.2 中性淀粉酶第一个拷贝的敲除 | 第32-35页 |
| 2.3.3 中性淀粉酶第二个拷贝的敲除 | 第35-40页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第40-56页 |
| 2.4.1 黑曲霉酸性淀粉酶缺陷菌株的改造和研究 | 第40-46页 |
| 2.4.2 基于黑曲霉酸性淀粉酶缺陷株的中性淀粉酶敲除改造和研究 | 第46-50页 |
| 2.4.3 黑曲霉中性淀粉酶第二个拷贝的敲除改造和研究 | 第50-56页 |
| 2.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 第三章 脯氨酰内肽酶在背景全部敲除的黑曲霉优化表达 | 第57-77页 |
| 3.1 引言 | 第57页 |
| 3.2 实验材料仪器和试剂 | 第57-59页 |
| 3.2.1 实验试剂和培养基 | 第57-59页 |
| 3.2.2 实验使用引物 | 第59页 |
| 3.3 构建终止子标记基因PyrGrecycle通用结构 | 第59-61页 |
| 3.4 优化脯氨酰内肽酶在黑曲霉中的表达 | 第61-65页 |
| 3.4.1 第一个拷贝的脯氨酰内肽酶在黑曲霉中的表达 | 第61-63页 |
| 3.4.2 第二个拷贝的脯氨酰内肽酶在黑曲霉中的表达 | 第63-65页 |
| 3.5 结果与讨论 | 第65-75页 |
| 3.5.1 构建终止子和标记基因PyrGRecycle通用质粒 | 第65-66页 |
| 3.5.2 基于杂合启动子的脯氨酰内肽酶的高效表达研究 | 第66-70页 |
| 3.5.3 基于糖化酶启动子的脯氨酰内肽酶及两拷贝的高效表达研究 | 第70-72页 |
| 3.5.4 脯氨酰内肽酶过量表达株的酶活测定和SDS-PAGE分析 | 第72-75页 |
| 3.6 本章小结 | 第75-77页 |
| 第四章 高产脯氨酰内肽酶黑曲霉菌株5L发酵测试 | 第77-88页 |
| 4.1 引言 | 第77页 |
| 4.2 主要培养基 | 第77-78页 |
| 4.3 主要设备和仪器 | 第78页 |
| 4.4 实验方法 | 第78-80页 |
| 4.4.1 种子液制备 | 第78-79页 |
| 4.4.2 第一个拷贝脯氨酰内肽酶5L发酵罐的发酵 | 第79页 |
| 4.4.3 发酵过程不同时间点的参数测定 | 第79-80页 |
| 4.4.4 两个拷贝表达脯氨酰内肽酶5L发酵罐发酵工艺的探究 | 第80页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第80-86页 |
| 4.5.1 工程菌发酵过程优化研究 | 第80-86页 |
| 4.5.2 两个拷贝的脯氨酰内肽酶5L发酵的分析 | 第86页 |
| 4.6 本章小结 | 第86-88页 |
| 结论与展望 | 第88-91页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 展望 | 第89-90页 |
| 本论文创新 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-96页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 附表 | 第98页 |
