| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第10-21页 |
| 1.1 极端海洋微生物及极端环境酶 | 第10-13页 |
| 1.1.1 极端环境微生物 | 第11-12页 |
| 1.1.2 极端环境酶 | 第12-13页 |
| 1.2 内切-1,4-β-葡聚糖酶 | 第13页 |
| 1.3 阿拉伯内切-1,4-β-半乳聚糖酶 | 第13页 |
| 1.4 磷酸戊糖变位酶 | 第13-16页 |
| 1.4.1 核糖5磷酸 | 第13-14页 |
| 1.4.2 核糖1磷酸 | 第14-15页 |
| 1.4.3 磷酸戊糖变位酶 | 第15-16页 |
| 1.5 表达载体及表达系统 | 第16-17页 |
| 1.5.1 质粒p ET-32a（+） | 第16-17页 |
| 1.5.2 表达系统E.coli BL21（D3） | 第17页 |
| 1.6 工程菌发酵条件优化 | 第17-19页 |
| 1.6.1 积分光密度法 | 第17-18页 |
| 1.6.2 Plackett-Burman设计 | 第18页 |
| 1.6.3 最陡爬坡试验 | 第18页 |
| 1.6.4 响应面试验 | 第18-19页 |
| 1.7 本课题研究意义及内容 | 第19-21页 |
| 第二章 嗜热酶基因工程菌的构建 | 第21-34页 |
| 2.1 主要实验仪器和材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 菌种、质粒、海栖热袍菌基因组 | 第21页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要实验材料 | 第22-24页 |
| 2.2 实验原理与方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 目的基因片段的扩增及PCR产物回收 | 第24-25页 |
| 2.2.2 克隆载体p MD18T-目的基因的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.3 p ET-32a(+)-目的基因表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4 E.coli DH5α-p MD18T-目的基因阳性克隆菌落的筛选与鉴定 | 第28页 |
| 2.2.5 E.coli BL21（D3）-p ET-32a(+)-目的基因表达菌株的获得 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 目的基因的PCR扩增 | 第28-30页 |
| 2.3.2 E.coli DH5α-p MD18T-目的基因阳性克隆菌落的筛选与鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.4 E.coli BL21（D3）-p ET-32a(+)-目的基因表达菌种的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.5 E.coli BL21（D3）-p ET-32a(+)-目的基因工程菌序列测定 | 第33页 |
| 2.4 结论 | 第33-34页 |
| 第三章 目的蛋白的表达和纯化 | 第34-49页 |
| 3.1 实验设备、实验材料和实验试剂 | 第34-38页 |
| 3.1.1 菌种 | 第34页 |
| 3.1.2 主要实验仪器和设备 | 第34页 |
| 3.1.3 主要实验材料 | 第34-38页 |
| 3.2 实验原理与方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 重组菌的生长曲线测定 | 第38页 |
| 3.2.2 目的蛋白的表达 | 第38-40页 |
| 3.2.3 目的蛋白的表达形式和性质分析 | 第40页 |
| 3.2.4 目的蛋白的纯化 | 第40页 |
| 3.2.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.3.1 重组菌的生长曲线测定 | 第41-42页 |
| 3.3.2 目的蛋白的表达 | 第42-43页 |
| 3.3.3 目的蛋白的表达形式和性质分析 | 第43-46页 |
| 3.3.4 目的蛋白纯化 | 第46页 |
| 3.3.5 考马斯亮蓝测定蛋白浓度 | 第46-47页 |
| 3.4 结论 | 第47-49页 |
| 第四章、响应面优化工程菌发酵条件 | 第49-62页 |
| 4.1 主要实验仪器和材料 | 第49-51页 |
| 4.1.1 菌种 | 第49页 |
| 4.1.2 实验主要仪器设备 | 第49页 |
| 4.1.3 主要实验材料 | 第49-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.2.1 Plackett-Burman试验 | 第51-52页 |
| 4.2.2 最陡爬坡试验 | 第52-53页 |
| 4.2.3 响应面试验 | 第53-54页 |
| 4.2.4 回归模型的验证 | 第54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-60页 |
| 4.3.1 Plackett-Burman试验 | 第54-55页 |
| 4.3.2 最陡爬坡试验 | 第55-56页 |
| 4.3.3 响应面试验 | 第56-57页 |
| 4.3.4 响应面因子交互作用分析 | 第57-59页 |
| 4.3.5 回归模型的验证 | 第59-60页 |
| 4.4 结论 | 第60-62页 |
| 第五章 总结与展望 | 第62-64页 |
| 5.1 总结 | 第62-63页 |
| 5.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
