摘要 | 第6-7页 |
Summary | 第7页 |
前言 | 第8-16页 |
第一部分: EV-D68的浓缩与纯化 | 第16-32页 |
1.实验材料 | 第16-19页 |
1.1 细胞 | 第16页 |
1.2 毒种 | 第16页 |
1.3 细胞培养液 | 第16页 |
1.4 细胞消化液 | 第16-17页 |
1.5 细胞维持液 | 第17页 |
1.6 细胞工厂系统 | 第17页 |
1.7 qRT-PCR引物 | 第17-18页 |
1.8 蛋白电泳SDS-PAGE胶Marker: | 第18页 |
1.9 主要试剂盒与试剂 | 第18页 |
1.10 一次性器材 | 第18页 |
1.11 主要仪器 | 第18-19页 |
2. 试验方法 | 第19-26页 |
2.1 细胞的培养与保存 | 第19-20页 |
2.2 病毒的培养与保存 | 第20-21页 |
2.3 EV-D68病毒感染Vero细胞的增值曲线的测定 | 第21页 |
2.4 病毒的浓缩与纯化 | 第21-23页 |
2.5 EV-D68电镜观察 | 第23页 |
2.6 蛋白含量的测定 | 第23-24页 |
2.7 感染性滴度的测定 | 第24页 |
2.8 病毒载量的测定 | 第24-26页 |
3. 结果与分析 | 第26-31页 |
3.1 增值曲线测定 | 第26-27页 |
3.2 纯化结果 | 第27-28页 |
3.3 病毒电镜 | 第28页 |
3.4 蛋白含量测定 | 第28-29页 |
3.5 病毒感染性滴度测定以及比较 | 第29-30页 |
3.6 病毒拷贝数的测定以及比较 | 第30-31页 |
4. 小结 | 第31-32页 |
第二部分: 免疫动物以及抗体的制备 | 第32-40页 |
1. 实验材料 | 第32-33页 |
1.1 动物 | 第32页 |
1.2 主要生化试剂 | 第32页 |
1.3 主要试剂盒 | 第32页 |
1.4 一次性器材 | 第32页 |
1.5 主要仪器 | 第32-33页 |
2. 实验方法 | 第33-37页 |
2.1 免疫抗原的选择与制备 | 第33页 |
2.2 免疫动物 | 第33页 |
2.3 血清的制备 | 第33-34页 |
2.4 免疫血清的中和抗体实验 | 第34-35页 |
2.5 血清抗体的纯化以及浓缩 | 第35-36页 |
2.6 SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
2.7 蛋白含量的检测 | 第36-37页 |
3 结果与分析 | 第37-39页 |
4. 小结 | 第39-40页 |
第三部分: ELISA方法的建立 | 第40-51页 |
1. 实验材料 | 第40页 |
1.1 实验试剂 | 第40页 |
1.2 实验器材 | 第40页 |
1.3 主要仪器 | 第40页 |
2. 试验方法 | 第40-44页 |
2.1 捕获抗体和检测抗体的选择 | 第40-42页 |
2.2 确定最佳条件 | 第42-43页 |
2.3 双抗体夹心ELISA方法的建立 | 第43-44页 |
3. 结果分析 | 第44-50页 |
3.1 最佳封闭条件的确定 | 第44-46页 |
3.2 确定最佳包板浓度、生物素检测抗体浓度以及亲和素酶浓度 | 第46页 |
3.3 ELISA方法的建立 | 第46-50页 |
4. 小结 | 第50-51页 |
讨论 | 第51-53页 |
参考文献 | 第53-56页 |
附录 | 第56-61页 |
致谢 | 第61页 |