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肠道病毒68型(EV-D68)抗原检测ELISA方法的建立

摘要第6-7页
Summary第7页
前言第8-16页
第一部分: EV-D68的浓缩与纯化第16-32页
    1.实验材料第16-19页
        1.1 细胞第16页
        1.2 毒种第16页
        1.3 细胞培养液第16页
        1.4 细胞消化液第16-17页
        1.5 细胞维持液第17页
        1.6 细胞工厂系统第17页
        1.7 qRT-PCR引物第17-18页
        1.8 蛋白电泳SDS-PAGE胶Marker:第18页
        1.9 主要试剂盒与试剂第18页
        1.10 一次性器材第18页
        1.11 主要仪器第18-19页
    2. 试验方法第19-26页
        2.1 细胞的培养与保存第19-20页
        2.2 病毒的培养与保存第20-21页
        2.3 EV-D68病毒感染Vero细胞的增值曲线的测定第21页
        2.4 病毒的浓缩与纯化第21-23页
        2.5 EV-D68电镜观察第23页
        2.6 蛋白含量的测定第23-24页
        2.7 感染性滴度的测定第24页
        2.8 病毒载量的测定第24-26页
    3. 结果与分析第26-31页
        3.1 增值曲线测定第26-27页
        3.2 纯化结果第27-28页
        3.3 病毒电镜第28页
        3.4 蛋白含量测定第28-29页
        3.5 病毒感染性滴度测定以及比较第29-30页
        3.6 病毒拷贝数的测定以及比较第30-31页
    4. 小结第31-32页
第二部分: 免疫动物以及抗体的制备第32-40页
    1. 实验材料第32-33页
        1.1 动物第32页
        1.2 主要生化试剂第32页
        1.3 主要试剂盒第32页
        1.4 一次性器材第32页
        1.5 主要仪器第32-33页
    2. 实验方法第33-37页
        2.1 免疫抗原的选择与制备第33页
        2.2 免疫动物第33页
        2.3 血清的制备第33-34页
        2.4 免疫血清的中和抗体实验第34-35页
        2.5 血清抗体的纯化以及浓缩第35-36页
        2.6 SDS-PAGE电泳第36页
        2.7 蛋白含量的检测第36-37页
    3 结果与分析第37-39页
    4. 小结第39-40页
第三部分: ELISA方法的建立第40-51页
    1. 实验材料第40页
        1.1 实验试剂第40页
        1.2 实验器材第40页
        1.3 主要仪器第40页
    2. 试验方法第40-44页
        2.1 捕获抗体和检测抗体的选择第40-42页
        2.2 确定最佳条件第42-43页
        2.3 双抗体夹心ELISA方法的建立第43-44页
    3. 结果分析第44-50页
        3.1 最佳封闭条件的确定第44-46页
        3.2 确定最佳包板浓度、生物素检测抗体浓度以及亲和素酶浓度第46页
        3.3 ELISA方法的建立第46-50页
    4. 小结第50-51页
讨论第51-53页
参考文献第53-56页
附录第56-61页
致谢第61页

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