| 致谢 | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-13页 |
| 中文摘要 | 第13-18页 |
| 英文摘要 | 第18-23页 |
| 论文创新点 | 第24-25页 |
| 缩略词表 | 第25-31页 |
| 1. 马兜铃酸-Ⅰ致胚胎干细胞衍生肝样组织癌前病变评价模型建立 | 第31-85页 |
| 引言 | 第31-33页 |
| 1.1 实验材料、仪器和试剂 | 第33-38页 |
| 1.1.1 细胞株与实验动物 | 第33-34页 |
| 1.1.2 实验仪器与器材 | 第34页 |
| 1.1.3 实验药物及试剂 | 第34-35页 |
| 1.1.4 抗体及试剂盒 | 第35-37页 |
| 1.1.5 主要实验试剂及其配制 | 第37-38页 |
| 1.2 实验方法 | 第38-49页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第38-41页 |
| 1.2.1.1 小鼠胚胎成纤维细胞的制备 | 第38-39页 |
| 1.2.1.2 饲养层细胞的制备 | 第39页 |
| 1.2.1.3 小鼠ES细胞复苏、支持培养及传代 | 第39-40页 |
| 1.2.1.4 ES细胞衍生肝样组织分化流程 | 第40页 |
| 1.2.1.5 MTT法确定AAI与EBs、成熟肝样组织共孵育浓度 | 第40-41页 |
| 1.2.2 EB细胞制备冰冻切片考察EB中、内胚层祖细胞表型 | 第41-42页 |
| 1.2.3 ALB-pro-eGFP-ES细胞系的构建 | 第42页 |
| 1.2.4 免疫荧光染色检测肝样组织内蛋白原位表达 | 第42页 |
| 1.2.5 H&E染色考察成熟肝样组织形态结构 | 第42页 |
| 1.2.6 流式细胞术检测肝细胞分化率 | 第42-43页 |
| 1.2.7 荧光定量RT-PCR检测基因表达 | 第43-45页 |
| 1.2.7.1 总RNA抽提 | 第43页 |
| 1.2.7.2 mRNA逆转录及qRT-PCR过程 | 第43-45页 |
| 1.2.8 ELISA法检测细胞培养上清液中ALB、IL-6、AFP含量 | 第45页 |
| 1.2.9 Periodic Acid-Schiff(PAS)染色检测糖原合成 | 第45页 |
| 1.2.10 吲哚氰绿(ICG)摄取实验 | 第45页 |
| 1.2.11 尿素合成实验 | 第45-46页 |
| 1.2.12 培养上清液中ALT、AST含量的检测 | 第46页 |
| 1.2.13 Western Blot法检测相关蛋白表达 | 第46-47页 |
| 1.2.13.1 细胞和组织总蛋白提取 | 第46页 |
| 1.2.13.2 细胞核与细胞质蛋白提取 | 第46-47页 |
| 1.2.13.3 蛋白质免疫印迹 | 第47页 |
| 1.2.14 裸鼠皮下荷瘤模型验证癌前病变肝样组织成瘤性 | 第47-48页 |
| 1.2.15 肿瘤组织石蜡切片H&E及免疫荧光染色 | 第48页 |
| 1.2.16 数据分析 | 第48-49页 |
| 1.3 实验结果 | 第49-78页 |
| 1.3.1 ES细胞衍生EBs及肝样组织表型及功能鉴定 | 第49-56页 |
| 1.3.1.1 ES细胞衍生肝样组织过程形态学观察 | 第49页 |
| 1.3.1.2 ES细胞衍生肝样组织分化终点表型鉴定 | 第49-54页 |
| 1.3.1.3 ES细胞衍生肝样组织分化终点功能鉴定 | 第54-56页 |
| 1.3.2 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织过程癌前病变评价模型构建 | 第56-72页 |
| 1.3.2.1 AAI加入时间确定 | 第56-57页 |
| 1.3.2.2 EBs贴壁分化肝样组织过程AAI加入浓度探索 | 第57-58页 |
| 1.3.2.3 AAI致肝样组织内肝样细胞膜损伤 | 第58-60页 |
| 1.3.2.4 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织过程旁分泌IL-6信号激活 | 第60-61页 |
| 1.3.2.5 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织癌前病变标志蛋白表达上调 | 第61页 |
| 1.3.2.6 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织中肝样细胞发生脱分化 | 第61-65页 |
| 1.3.2.7 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织NF-κB及AP-1炎症信号通路激活 | 第65页 |
| 1.3.2.8 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织MAPK信号通路激活 | 第65-67页 |
| 1.3.2.9 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织异位移植瘤呈HCC样癌前病变表型 | 第67-68页 |
| 1.3.2.10 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织异位移植瘤HCC样表型蛋白表达 | 第68-72页 |
| 1.3.3 AAI致分化成熟的肝样组织癌前病变评价模型构建 | 第72-76页 |
| 1.3.3.1 AAI与成熟肝样组织共孵育时间及浓度确定 | 第72-74页 |
| 1.3.3.2 AAI致成熟肝样组织旁分泌IL-6信号激活 | 第74页 |
| 1.3.3.3 AAI致成熟肝样组织癌前病变标志蛋白表达 | 第74-75页 |
| 1.3.3.4 AAI致成熟肝样组织NF-κB(p65)表达 | 第75-76页 |
| 1.3.4 AAI致ES细胞衍生EBs分化肝样组织及成熟肝样组织癌前病变评价体系工作流程 | 第76-78页 |
| 1.4 讨论 | 第78-83页 |
| 1.5 小结 | 第83-85页 |
| 2. 积雪草酸、五味子乙素对马兜铃酸-Ⅰ致胚胎干细胞衍生EBs分化肝样组织炎症及癌前病变对抗活性相关研究(附) | 第85-107页 |
| 引言 | 第85-86页 |
| 2.1 实验材料、仪器和试剂 | 第86-87页 |
| 2.1.1 细胞株与实验动物 | 第86-87页 |
| 2.1.2 实验仪器与器材 | 第87页 |
| 2.1.3 实验药物及试剂 | 第87页 |
| 2.1.4 抗体及试剂盒 | 第87页 |
| 2.1.5 主要实验试剂及其配制 | 第87页 |
| 2.2 实验方法 | 第87-90页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第87-88页 |
| 2.2.1.1 MEF及饲养层细胞的制备 | 第87页 |
| 2.2.1.2 ES细胞复苏、支持培养及传代 | 第87页 |
| 2.2.1.3 MTT法分别确定AA、SchB与EBs共孵育浓度 | 第87-88页 |
| 2.2.1.4 ES细胞衍生肝样组织分化流程 | 第88页 |
| 2.2.2 免疫荧光染色检测肝样组织内相关蛋白的表达 | 第88-89页 |
| 2.2.3 流式细胞术检测肝细胞分化率 | 第89页 |
| 2.2.4 ELISA法检测细胞培养上清液中ALB、IL-6、AFP含量 | 第89页 |
| 2.2.5 培养上清液中ALT含量的检测 | 第89页 |
| 2.2.6 Western Blot法检测相关蛋白表达 | 第89页 |
| 2.2.7 裸鼠皮下荷瘤模型验证癌前病变肝样组织成瘤性 | 第89页 |
| 2.2.8 肿瘤组织石蜡切片H&E及免疫荧光染色 | 第89页 |
| 2.2.9 数据分析 | 第89-90页 |
| 2.3 实验结果 | 第90-103页 |
| 2.3.1 AA、SchB单独及与AAI合用对ES细胞及EBs存活力的影响 | 第90-92页 |
| 2.3.2 AA、SchB分别与AAI共孵育对ES细胞衍生肝样组织分化及形态学的影响 | 第92-93页 |
| 2.3.3 AA、SchB下调AAI致EBs分化肝样组织炎症信号IL-6/STAT3激活水平 | 第93-98页 |
| 2.3.4 AA下调AAI致EBs分化肝样组织癌前病变相关标志蛋白表达 | 第98页 |
| 2.3.5 SchB对AAI致EBs分化肝样组织癌前病变标志蛋白的表达无影响 | 第98-99页 |
| 2.3.6 AA下调AAI致EBs分化肝样组织p-ERK1/2及c-Fos的表达上调 | 第99-100页 |
| 2.3.7 SchB下调AAI致EBs分化肝样组织p-ERK1/2及c-Fos的表达上调 | 第100页 |
| 2.3.8 AA对AAI致EBs分化肝样组织成瘤表型的影响 | 第100-103页 |
| 2.3.9 AA及Sch B对AAI致EBs分化肝样组织炎症及癌前病变对抗活性总结 | 第103页 |
| 2.4 讨论 | 第103-106页 |
| 2.5 小结 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-115页 |
| 综述 干细胞分化肝细胞样细胞在生物学和医学领域的研究进展 | 第115-133页 |
| 参考文献 | 第126-133页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第133-137页 |
