| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.2 亚麻荠概述 | 第10-14页 |
| 1.2.1 亚麻荠的食用价值 | 第10-11页 |
| 1.2.2 亚麻荠的工业价值 | 第11页 |
| 1.2.3 亚麻荠在生物燃油领域中的应用 | 第11-12页 |
| 1.2.4 亚麻荠优良栽培特性 | 第12-13页 |
| 1.2.5 亚麻荠育种的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 植物脂肪酸合成 | 第14-16页 |
| 1.3.1 植物中脂肪酸脱氢酶(FAD2)的研究进展 | 第15页 |
| 1.3.2 植物中脂肪酸延长酶(FAE1)的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 根癌农杆菌介导遗传转化 | 第16-17页 |
| 1.4.1 根癌农杆菌转基因分子机制 | 第16页 |
| 1.4.2 根癌农杆菌介导转化方法 | 第16-17页 |
| 1.5 人工微RNA干扰技术及其在植物中的应用 | 第17-21页 |
| 1.5.1 微RNA (miRNA)研究概述 | 第17-18页 |
| 1.5.2 人工微RNA (amiRNA)的设计原理 | 第18页 |
| 1.5.3 amiRNA沉默基因表达的优势 | 第18-19页 |
| 1.5.4 amiRNA在植物改良中的应用 | 第19-21页 |
| 1.6 论文的研究目的、意义及主要内容 | 第21-23页 |
| 1.6.1 论文的研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 亚麻荠品种 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒与菌种 | 第23页 |
| 2.1.3 仪器设备与耗材 | 第23-24页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.5 溶液与培养基配制 | 第25-26页 |
| 2.2 待转化亚麻荠品种的选育 | 第26-27页 |
| 2.2.1 不同亚麻荠品种种子脂肪酸组分及含量的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.2 待转植株的培育 | 第27页 |
| 2.3 PBinGlyRed2-CsFADEamiR干扰载体的构建与鉴定 | 第27-31页 |
| 2.3.1 CsFADEamiR片段的扩增及鉴定 | 第27-30页 |
| 2.3.2 pUC-T-CsFADEamiR、pBinGlyRed2质粒的双酶切及回收 | 第30-31页 |
| 2.3.3 pBinGlyRed2-、-CsFADEamiR片段的连接 | 第31页 |
| 2.3.4 PBinGlyRed2-CsFADEamiR重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| 2.4 农杆菌介导真空渗透转化亚麻荠 | 第31-33页 |
| 2.4.1 PBinGlyRed2-CsFADEamiR重组质粒转化农杆菌 | 第31-32页 |
| 2.4.2 渗透介质的制备 | 第32页 |
| 2.4.3 真空渗透转化亚麻荠 | 第32-33页 |
| 2.5 亚麻荠(WT)不同器官中Csa-miR159a的基因表达分析 | 第33-37页 |
| 2.5.1 Csa-miR159a茎-环特异性引物的设计 | 第33-34页 |
| 2.5.2 WT不同器官中总RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.5.3 Csa-miR159a基因的RT-PCR扩增 | 第35-36页 |
| 2.5.4 荧光定量PCR测定不同器官中Csa-miR159a的表达差异 | 第36-37页 |
| 2.6 T_1代转基因种子的筛选及鉴定 | 第37-38页 |
| 2.6.1 T_1代转基因种子的筛选 | 第37页 |
| 2.6.2 T_1代转基因植株的验证 | 第37-38页 |
| 2.7 转基因植株性状分析 | 第38页 |
| 2.7.1 T_2种子分离比 | 第38页 |
| 2.7.2 T_2种子百粒重 | 第38页 |
| 2.7.3 T_2种子发芽率 | 第38页 |
| 2.7.4 T_2脂肪酸组分及含量 | 第38页 |
| 2.7.5 FAD2、FAE1基因抑制效率 | 第38页 |
| 2.8 FAD2基因在亚麻荠种子不同发育阶段的表达 | 第38-40页 |
| 2.8.1 不同FAD2基因引物设计 | 第38-39页 |
| 2.8.2 FAD2基因PCR分析 | 第39页 |
| 2.8.3 FAD2基因q-PCR检测 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-58页 |
| 3.1 PBinGlyRed2-CsFADEamiR干扰载体的构建与鉴定 | 第40-44页 |
| 3.1.1 CsFADEamiR片段的扩增及回收 | 第40页 |
| 3.1.2 CsFADEamiR片段连接pUC-T载体 | 第40-41页 |
| 3.1.3 T-CsFADEamiR质粒提取及酶切验证 | 第41页 |
| 3.1.4 CsFADEamiR测序鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.5 PBinGlyRed2-片段的双酶切回收 | 第42-43页 |
| 3.1.6 PBinGlyRed2-、-CsFADEamiR片段连接及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2 PBinGlyRed2-CsFADEamiR转化农杆菌后的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.1 PBinGlyRed2-CsFADEamiR转化农杆菌后单酶切验证 | 第44页 |
| 3.2.2 PBinGlyRed2-CsFADEamiR转化农杆菌后PCR电泳检测 | 第44-45页 |
| 3.3 亚麻荠待转品种的筛选与种植 | 第45-46页 |
| 3.3.1 亚麻荠待转品种的筛选 | 第45页 |
| 3.3.2 亚麻荠待转品种的种植 | 第45-46页 |
| 3.4 亚麻荠不同器官中Csa-miR159a的基因表达分析 | 第46-48页 |
| 3.4.1 不同器官中总RNA的提取 | 第46页 |
| 3.4.2 亚麻荠不同器官中Csa-miR159aRT-PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4.3 亚麻荠不同器官中Csa-miR159a实时荧光定量PCR分析 | 第47-48页 |
| 3.5 T_1转基因种子的筛选及鉴定 | 第48-50页 |
| 3.5.1 T_1转基因种子的筛选 | 第48-49页 |
| 3.5.2 T_1转基因植株的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.6 转基因植株性状分析 | 第50-55页 |
| 3.6.1 T_2种子分离比 | 第50页 |
| 3.6.2 T_2种子百粒重 | 第50-51页 |
| 3.6.3 T_2种子发芽率 | 第51-52页 |
| 3.6.4 T_2脂肪酸组分及含量分析 | 第52-55页 |
| 3.7 发育种子中FAD2基因的表达情况 | 第55-58页 |
| 3.7.1 种子不同发育时期形态比对 | 第55页 |
| 3.7.2 FAD2-1、FAD2-2及FAD2-3基因PCR扩增 | 第55页 |
| 3.7.3 FAD2-1、FAD2-2及FAD2-3基因qPCR检测 | 第55-58页 |
| 4 结论 | 第58-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-68页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文等情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
