莱茵衣藻纤毛内蛋白IFT139的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-16页 |
| 1.1 莱茵衣藻及纤毛 | 第8-10页 |
| 1.1.1 莱茵衣藻 | 第8-9页 |
| 1.1.2 纤毛的结构 | 第9-10页 |
| 1.1.3 纤毛的功能 | 第10页 |
| 1.2 纤毛运送蛋白(IFT) | 第10-11页 |
| 1.2.1 IFT的发现 | 第10页 |
| 1.2.2 IFT的组成 | 第10-11页 |
| 1.2.3 IFT的运动机制 | 第11页 |
| 1.3 IFTA | 第11-12页 |
| 1.3.1 IFTA的组成 | 第11-12页 |
| 1.3.2 IFT1 39 | 第12页 |
| 1.4 纤毛病 | 第12-13页 |
| 1.4.1 纤毛相关疾病 | 第12-13页 |
| 1.4.2 与IFT139相关的疾病 | 第13页 |
| 1.5 融合蛋白标签 | 第13-15页 |
| 1.5.1 HIS标签蛋白 | 第13-14页 |
| 1.5.2 GST标签蛋白 | 第14页 |
| 1.5.3 MBP标签蛋白 | 第14页 |
| 1.5.4 HA标签蛋白 | 第14页 |
| 1.5.5 eGFP标签蛋白 | 第14-15页 |
| 1.6 本实验的研究意义及研究内容 | 第15-16页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第15页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-24页 |
| 2.1.1 质粒,引物及菌种 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16-19页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第19-21页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第21页 |
| 2.1.5 溶液的配制 | 第21-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-43页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第25-31页 |
| 2.2.3 融合蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第31-33页 |
| 2.2.4 蛋白的纯化 | 第33-36页 |
| 2.2.5 多克隆抗体的制备及效价的测定 | 第36-39页 |
| 2.2.6 抗体的纯化及特异性分析 | 第39-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-56页 |
| 3.1 莱茵衣藻基因IFT139生物信息学分析 | 第43-45页 |
| 3.1.1 IFT139蛋白序列理化特性 | 第43-44页 |
| 3.1.2 IFT139蛋白二级结构分析 | 第44页 |
| 3.1.3 IFT139蛋白三级结构分析 | 第44-45页 |
| 3.2 原核表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 3.2.1 大肠杆菌表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.2 重组质粒的双切验证 | 第46-48页 |
| 3.3 融合蛋白的表达及可溶性分析 | 第48-51页 |
| 3.4 融合蛋白的纯化 | 第51-53页 |
| 3.5 多克隆抗体的制备及效价的测定 | 第53-54页 |
| 3.5.1 免疫 | 第53页 |
| 3.5.2 效价的测定 | 第53-54页 |
| 3.6 抗体的纯化及分析 | 第54-56页 |
| 3.6.1 Protein A纯化 | 第54-55页 |
| 3.6.3 切膜纯化 | 第55页 |
| 3.6.4 Western Blotiing分析 | 第55-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 4.1 原核表达载体的构建 | 第56页 |
| 4.2 融合蛋白的表达及纯化 | 第56页 |
| 4.3 多克隆抗体的制备及分析 | 第56-57页 |
| 5 展望 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66页 |
