| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第11-17页 |
| 1.1 几丁质 | 第11-13页 |
| 1.1.1 几丁质的结构与性质 | 第11页 |
| 1.1.2 几丁质及其衍生物的应用 | 第11-13页 |
| 1.2 几丁质酶 | 第13-15页 |
| 1.2.1 几丁质酶的来源 | 第13页 |
| 1.2.2 几丁质酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.2.3 几丁质酶的结构 | 第14页 |
| 1.2.4 几丁质酶的性质 | 第14-15页 |
| 1.2.5 几丁质酶的应用 | 第15页 |
| 1.3 芽孢杆菌几丁质酶的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 本研究的主要内容 | 第16页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 具有固氮功能的高产几丁质酶芽孢杆菌的筛选 | 第17-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 筛选产几丁质酶的芽孢杆菌 | 第18页 |
| 2.2.2 筛选产几丁质酶固氮的芽孢杆菌 | 第18页 |
| 2.2.3 菌种鉴定 | 第18-19页 |
| 2.2.4 固氮酶基因nifH的克隆 | 第19-20页 |
| 2.2.5 几丁质酶酶活力的测定 | 第20-21页 |
| 2.2.6 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 革兰氏染色 | 第21页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第21-27页 |
| 2.3.1 筛选产几丁质酶的芽孢杆菌结果 | 第21页 |
| 2.3.2 筛选产几丁质酶固氮的芽孢杆菌结果 | 第21-23页 |
| 2.3.3 菌种鉴定结果 | 第23-25页 |
| 2.3.4 固氮酶基因nifH的克隆结果 | 第25-26页 |
| 2.3.5 几丁质酶酶活力的测定结果 | 第26-27页 |
| 2.3.6 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 革兰氏染色结果 | 第27页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶酶学特性初步研究 | 第28-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.1 菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 3.1.4 培养基 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶粗酶液获取 | 第28-29页 |
| 3.2.2 不同温度对几丁质酶酶活力的影响 | 第29页 |
| 3.2.3 不同pH值对几丁质酶酶活力的影响 | 第29页 |
| 3.2.4 不同底物浓度对几丁质酶酶活力的影响 | 第29页 |
| 3.2.5 不同金属离子对几丁质酶酶活力的影响 | 第29页 |
| 3.2.6 不同Fe2+离子浓度对几丁质酶酶活力的影响 | 第29-30页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第30-33页 |
| 3.3.1 不同温度对几丁质酶酶活力的影响结果 | 第30页 |
| 3.3.2 不同pH值对几丁质酶酶活力的影响结果 | 第30-31页 |
| 3.3.3 不同底物浓度对几丁质酶酶活力的影响结果 | 第31-32页 |
| 3.3.4 不同金属离子对几丁质酶酶活力的影响结果 | 第32页 |
| 3.3.5 不同Fe~(2+)离子浓度对几丁质酶酶活力的影响结果 | 第32-33页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶发酵培养基配方及培养条件优化 | 第34-42页 |
| 4.1 实验材料 | 第34页 |
| 4.1.1 菌株 | 第34页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第34页 |
| 4.1.4 培养基 | 第34页 |
| 4.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 4.2.1 发酵时间对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第34-35页 |
| 4.2.2 接种量对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第35页 |
| 4.2.3 培养基pH值对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第35页 |
| 4.2.4 装瓶量对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第35页 |
| 4.2.5 碳源对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第35页 |
| 4.2.6 氮源对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第35-36页 |
| 4.2.7 金属离子对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第36页 |
| 4.2.8 正交试验 | 第36-37页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第37-41页 |
| 4.3.1 发酵时间对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第37页 |
| 4.3.2 接种量对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第37页 |
| 4.3.3 培养基pH值对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第37-38页 |
| 4.3.4 装瓶量对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第38-39页 |
| 4.3.5 碳源对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第39页 |
| 4.3.6 氮源对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 4.3.7 金属离子对解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 产几丁质酶酶活力的影响 | 第40页 |
| 4.3.8 正交试验结果 | 第40-41页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因克隆 | 第42-55页 |
| 5.1 实验材料 | 第42页 |
| 5.1.1 菌株 | 第42页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 5.1.4 培养基 | 第42页 |
| 5.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 5.2.1 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 基因组DNA提取 | 第42页 |
| 5.2.2 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因部分保守片段PCR扩增 | 第42-43页 |
| 5.2.3 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因部分保守片段测序 | 第43-44页 |
| 5.2.4 Tail-PCR扩增解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因部分保守片段两侧翼未知序列 | 第44-49页 |
| 5.2.5 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因上中下游三段序列拼接及几丁质酶基因分析 | 第49页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第49-54页 |
| 5.3.1 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因部分保守片段PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| 5.3.2 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因部分保守片段测序结果 | 第50-51页 |
| 5.3.3 Tail-PCR扩增解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因部分保守片段两侧翼未知序列结果 | 第51-53页 |
| 5.3.4 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因上中下游三段序列拼接及几丁质酶基因分析结果 | 第53-54页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第六章 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因于大肠杆菌DH5a中分泌表达 | 第55-64页 |
| 6.1 实验材料 | 第55页 |
| 6.1.1 菌株与载体质粒 | 第55页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第55页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第55页 |
| 6.1.4 培养基 | 第55页 |
| 6.2 实验方法 | 第55-60页 |
| 6.2.1 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因于大肠杆菌DH5a中分泌表达 | 第55-59页 |
| 6.2.2 SDS-PAGE检测分泌表达的几丁质酶 | 第59-60页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第60-63页 |
| 6.3.1 解木聚糖类芽孢杆菌CDY-607 几丁质酶基因于大肠杆菌DH5a中分泌表达结果 | 第60-63页 |
| 6.3.2 SDS-PAGE检测分泌表达的几丁质酶结果 | 第63页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第72页 |
