摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
主要缩略词 | 第9-14页 |
前言 | 第14-15页 |
第一章 文献综述 | 第15-25页 |
1 iPS细胞(诱导多潜能干细胞) | 第15-16页 |
·转染多能性转录因子诱导体细胞为多能性干细胞 | 第15-16页 |
2 多能性相关转录因子在维持细胞多能性中的作用 | 第16-19页 |
·Oct4转录因子的功能 | 第16页 |
·Sox2转录因子的功能 | 第16-17页 |
·c-Myc转录因子的功能 | 第17-18页 |
·Klf4转录因子的功能 | 第18页 |
·Nanog转录因子的功能 | 第18-19页 |
·lin28转录因子的功能 | 第19页 |
3 多能性相关转录因子诱导细胞多能性的分子机理 | 第19-20页 |
4 多种制备iPS细胞的方法 | 第20-21页 |
5 iPS细胞研究历程 | 第21-24页 |
6 绵羊iPS细胞最新研究进展 | 第24-25页 |
第二章 实验研究 | 第25-64页 |
实验一 中国美利奴成纤维细胞的原代和传代培养 | 第25-30页 |
1 材料与方法 | 第25-27页 |
·材料 | 第25-26页 |
·实验动物 | 第25页 |
·主要实验仪器 | 第25页 |
·主要试剂 | 第25-26页 |
·方法 | 第26-27页 |
·采样 | 第26页 |
·培养液的配制 | 第26页 |
·原代培养 | 第26页 |
·传代培养 | 第26-27页 |
·细胞冻存 | 第27页 |
·细胞复苏 | 第27页 |
2 结果 | 第27-28页 |
·组织块贴壁培养结果 | 第27-28页 |
·胶原酶消化培养结果 | 第28页 |
·双酶消化培养结果 | 第28页 |
3 讨论 | 第28-29页 |
4 结论 | 第29-30页 |
实验二 电穿孔转染制备绵羊诱导多潜能干细胞方法的优化 | 第30-43页 |
1 材料与方法 | 第30-35页 |
·材料 | 第30-31页 |
·实验动物 | 第30-31页 |
·实验仪器 | 第31页 |
·实验试剂 | 第31页 |
·方法 | 第31-35页 |
·原代细胞培养 | 第31页 |
·培养液的配制 | 第31页 |
·无饲养层培养皿的制备 | 第31-32页 |
·质粒的制备 | 第32-34页 |
·电穿孔转染方法 | 第34页 |
·绵羊iPS细胞克隆初步检测方法 | 第34-35页 |
2 结果 | 第35-41页 |
·原代细胞培养 | 第35页 |
·质粒的浓度和纯度 | 第35-36页 |
·电转染程序的筛选 | 第36-37页 |
·绵羊iPS细胞克隆的形成与初步鉴定 | 第37-38页 |
·电穿孔转染时细胞密度对iPS细胞克隆形成的影响 | 第38-39页 |
·电转染时不同质粒质量浓度对iPS细胞克隆形成的影响 | 第39-40页 |
·不同质粒比例对iPS细胞克隆形成的影响 | 第40页 |
·培养液中有无添加VC,对iPS细胞克隆形成的影响 | 第40-41页 |
3 讨论 | 第41-42页 |
4 结论 | 第42-43页 |
实验三 绵羊诱导多潜能干细胞鉴定 | 第43-53页 |
1 材料与方法 | 第43-49页 |
·材料 | 第43-44页 |
·实验动物 | 第43页 |
·实验仪器 | 第43页 |
·实验试剂 | 第43-44页 |
·溶液试剂配制 | 第44页 |
·方法 | 第44-49页 |
·绵羊iPS细胞的制备 | 第44-45页 |
·绵羊iPS细胞的鉴定 | 第45-49页 |
2 结果与分析 | 第49-51页 |
·形态学鉴定 | 第49-50页 |
·AKP染色结果 | 第50页 |
·免疫染色结果 | 第50-51页 |
·实时荧光定量PCR结果 | 第51页 |
3 讨论 | 第51-52页 |
4 结论 | 第52-53页 |
实验四 转录组测序分析 | 第53-64页 |
1 材料和方法 | 第53-55页 |
·样品采集 | 第53页 |
·RNA提取 | 第53页 |
·转录组测序流程 | 第53-54页 |
·转录组数据分析 | 第54-55页 |
2 结果 | 第55-62页 |
·样本RNA结果 | 第55页 |
·转录组测序结果 | 第55-62页 |
·不同诱导时期细胞RNA-seq转录组数据拼接及注释结果 | 第55-59页 |
·诱导30天和0天细胞差异表达基因的GO功能分析 | 第59-60页 |
·诱导30天和0天细胞差异表达基因Unigene的KEGG富集分析 | 第60页 |
·不同时期细胞差异基因表达分析 | 第60-61页 |
·个别干性相关基因差异显著基因比较 | 第61-62页 |
3 讨论 | 第62页 |
4 结论 | 第62-64页 |
第三章 总结 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-75页 |
致谢 | 第75-76页 |
作者简介 | 第76-77页 |
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第77页 |