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绵羊诱导多能性干细胞的制作与鉴定研究

摘要第1-7页
Abstract第7-9页
主要缩略词第9-14页
前言第14-15页
第一章 文献综述第15-25页
 1 iPS细胞(诱导多潜能干细胞)第15-16页
   ·转染多能性转录因子诱导体细胞为多能性干细胞第15-16页
 2 多能性相关转录因子在维持细胞多能性中的作用第16-19页
   ·Oct4转录因子的功能第16页
   ·Sox2转录因子的功能第16-17页
   ·c-Myc转录因子的功能第17-18页
   ·Klf4转录因子的功能第18页
   ·Nanog转录因子的功能第18-19页
   ·lin28转录因子的功能第19页
 3 多能性相关转录因子诱导细胞多能性的分子机理第19-20页
 4 多种制备iPS细胞的方法第20-21页
 5 iPS细胞研究历程第21-24页
 6 绵羊iPS细胞最新研究进展第24-25页
第二章 实验研究第25-64页
 实验一 中国美利奴成纤维细胞的原代和传代培养第25-30页
  1 材料与方法第25-27页
   ·材料第25-26页
     ·实验动物第25页
     ·主要实验仪器第25页
     ·主要试剂第25-26页
   ·方法第26-27页
     ·采样第26页
     ·培养液的配制第26页
     ·原代培养第26页
     ·传代培养第26-27页
     ·细胞冻存第27页
     ·细胞复苏第27页
  2 结果第27-28页
   ·组织块贴壁培养结果第27-28页
   ·胶原酶消化培养结果第28页
   ·双酶消化培养结果第28页
  3 讨论第28-29页
  4 结论第29-30页
 实验二 电穿孔转染制备绵羊诱导多潜能干细胞方法的优化第30-43页
  1 材料与方法第30-35页
   ·材料第30-31页
     ·实验动物第30-31页
     ·实验仪器第31页
     ·实验试剂第31页
   ·方法第31-35页
     ·原代细胞培养第31页
     ·培养液的配制第31页
     ·无饲养层培养皿的制备第31-32页
     ·质粒的制备第32-34页
     ·电穿孔转染方法第34页
     ·绵羊iPS细胞克隆初步检测方法第34-35页
  2 结果第35-41页
   ·原代细胞培养第35页
   ·质粒的浓度和纯度第35-36页
   ·电转染程序的筛选第36-37页
   ·绵羊iPS细胞克隆的形成与初步鉴定第37-38页
   ·电穿孔转染时细胞密度对iPS细胞克隆形成的影响第38-39页
   ·电转染时不同质粒质量浓度对iPS细胞克隆形成的影响第39-40页
   ·不同质粒比例对iPS细胞克隆形成的影响第40页
   ·培养液中有无添加VC,对iPS细胞克隆形成的影响第40-41页
  3 讨论第41-42页
  4 结论第42-43页
 实验三 绵羊诱导多潜能干细胞鉴定第43-53页
  1 材料与方法第43-49页
   ·材料第43-44页
     ·实验动物第43页
     ·实验仪器第43页
     ·实验试剂第43-44页
     ·溶液试剂配制第44页
   ·方法第44-49页
     ·绵羊iPS细胞的制备第44-45页
     ·绵羊iPS细胞的鉴定第45-49页
  2 结果与分析第49-51页
   ·形态学鉴定第49-50页
   ·AKP染色结果第50页
   ·免疫染色结果第50-51页
   ·实时荧光定量PCR结果第51页
  3 讨论第51-52页
  4 结论第52-53页
 实验四 转录组测序分析第53-64页
  1 材料和方法第53-55页
   ·样品采集第53页
   ·RNA提取第53页
   ·转录组测序流程第53-54页
   ·转录组数据分析第54-55页
  2 结果第55-62页
   ·样本RNA结果第55页
   ·转录组测序结果第55-62页
     ·不同诱导时期细胞RNA-seq转录组数据拼接及注释结果第55-59页
     ·诱导30天和0天细胞差异表达基因的GO功能分析第59-60页
     ·诱导30天和0天细胞差异表达基因Unigene的KEGG富集分析第60页
     ·不同时期细胞差异基因表达分析第60-61页
     ·个别干性相关基因差异显著基因比较第61-62页
  3 讨论第62页
  4 结论第62-64页
第三章 总结第64-65页
参考文献第65-75页
致谢第75-76页
作者简介第76-77页
石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表第77页

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