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白念珠菌CaGDT1基因的功能研究

摘要第1-4页
Abstract第4-7页
第一章 绪论第7-12页
   ·白念珠菌简介第7页
     ·白念珠菌简介第7页
   ·胞内钙稳态以及钙信号途径第7-9页
     ·细胞内钙稳态第7-8页
     ·细胞钙/钙调磷酸酯酶信号途径第8-9页
   ·白念珠菌细胞壁的研究第9页
     ·细胞壁结构第9页
     ·细胞壁压力应答第9页
   ·膜蛋白家族UPF0016 及其成员简介第9-11页
     ·TMEM165 和ScGdt1 蛋白简介第9-10页
     ·CaGdt1 蛋白简介第10-11页
   ·本课题研究的内容及意义第11-12页
第二章 材料与方法第12-27页
   ·实验仪器与材料第12-19页
     ·实验仪器第12页
     ·主要实验试剂及试剂盒第12-14页
     ·实验所需溶液及配置方法第14-16页
     ·实验用培养基的配制第16-17页
     ·实验所用菌株第17-18页
     ·实验所用质粒第18页
     ·实验所用引物第18-19页
   ·实验方法第19-27页
     ·菌株培养与保存第19页
     ·碱裂解法提取质粒第19-20页
     ·酶切反应体系的建立第20页
     ·连接反应体系的建立第20页
     ·大肠杆菌感受态细胞的转化第20-21页
     ·PCR扩增DNA片段第21页
     ·白念珠菌细胞的转化第21-22页
     ·白念珠菌基因组的提取第22页
     ·细胞中总蛋白的提取第22页
     ·β-半乳糖苷酶(lacZ)活性的测定第22-23页
     ·Western blot分析第23页
     ·45Ca~(2+)吸收分析第23页
     ·细胞生存和细胞的完整性分析第23页
     ·细胞总RNA的提取以及实时定量PCR第23-24页
     ·荧光定位实验第24-25页
     ·直接免疫荧光法检测蛋白亚细胞定位第25页
     ·菌丝发育实验和倍比稀释表型实验第25页
     ·小鼠毒力实验实验第25-27页
第三章 实验过程与结果讨论第27-42页
   ·CaGDT1 与ScGDT1 的同源性验证第27页
   ·白念珠菌gdt1/gdt1 和gdt1/gdt1 pmr1/pmr1 缺失株的构建第27-31页
     ·白念珠菌CaGDT1 敲除质粒的构建第27-29页
     ·白念珠菌CaGDT1 基因的敲除第29-31页
   ·白念珠菌gdt1/gdt1 和gdt1/gdt1 pmr1/pmr1 缺失株表型筛选第31-32页
   ·探究gdt1/gdt1 pmr1/pmr1 缺失株中钙调磷酸酯酶的作用第32-34页
   ·探究CaGdt1 对胞内钙稳态的作用第34-35页
   ·探究CaGDT1 与CaPMC1、CaVCX1 在钙稳态调节中功能关系第35-36页
   ·探究CaGdt1 在细胞壁完整性途径中的作用第36-37页
   ·探究CaGdt1 的亚细胞定位第37-38页
   ·白念珠菌CaGDT1 基因缺失株形态学研究第38-40页
     ·CaGDT1 缺失株菌丝形态观察第38-40页
     ·CaGDT1 缺失株菌落形态观察第40页
   ·白念珠菌CaGDT1 基因缺失株小鼠毒力研究第40-42页
主要结论与展望第42-44页
 主要结论第42-43页
 展望第43-44页
致谢第44-45页
参考文献第45-48页
附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文第48页

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