| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| ·苯丙素类物质概述 | 第8-10页 |
| ·植物次生代谢产物 | 第8页 |
| ·苯丙素类物质及应用 | 第8-9页 |
| ·苯丙素类物质的生物合成途径 | 第9-10页 |
| ·对香豆酸及其生物合成 | 第10-11页 |
| ·对香豆酸简介 | 第10页 |
| ·对香豆酸合成的现状及存在的问题 | 第10-11页 |
| ·酪氨酸解氨酶的研究进展 | 第11-12页 |
| ·定向进化方法 | 第12-13页 |
| ·定向进化的发展 | 第12页 |
| ·随机突变技术 | 第12页 |
| ·应用于随机突变过程的全质粒PCR技术 | 第12-13页 |
| ·研究意义与内容 | 第13-15页 |
| ·研究意义 | 第13页 |
| ·课题来源及研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第15-16页 |
| ·主要培养基 | 第16-17页 |
| ·分子生物学操作 | 第17-19页 |
| ·载体构建 | 第17页 |
| ·易错PCR | 第17-18页 |
| ·定点突变 | 第18-19页 |
| ·培养方法 | 第19-20页 |
| ·诱导表达及胞内粗酶液的制备 | 第19-20页 |
| ·发酵生产对香豆酸 | 第20页 |
| ·纯化及分析方法 | 第20-22页 |
| ·酶的纯化 | 第20页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第20页 |
| ·酶活力的测定 | 第20-21页 |
| ·酶学性质相关参数的测定 | 第21页 |
| ·对香豆酸的液相分析方法 | 第21-22页 |
| ·高通量筛选方法 | 第22-23页 |
| ·平板检测法 | 第22页 |
| ·酶活检测法 | 第22页 |
| ·产物检测法 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-37页 |
| ·表达载体对大肠杆菌中TAL表达及对香豆酸合成的影响 | 第23-28页 |
| ·表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·诱导表达及酶活检测 | 第24-25页 |
| ·TAL的纯化 | 第25-26页 |
| ·TAL的酶学性质分析 | 第26-27页 |
| ·基于不同表达载体的对香豆酸合成对比 | 第27-28页 |
| ·随机突变方法改造TAL | 第28-33页 |
| ·随机突变所用表达载体的选择 | 第28-29页 |
| ·TAL随机突变库的建立 | 第29-30页 |
| ·高通量筛选方法的选择 | 第30页 |
| ·正向突变体的筛选 | 第30-32页 |
| ·突变体的纯化及酶学参数分析 | 第32-33页 |
| ·突变位点的单一及叠加突变与分析 | 第33-37页 |
| ·单一突变位点的定点突变 | 第33页 |
| ·单点突变酶发酵产对香豆酸情况的比较 | 第33-34页 |
| ·单点突变酶的纯化与酶学参数分析 | 第34-35页 |
| ·优势位点的结构分析 | 第35-36页 |
| ·优势位点的叠加突变 | 第36-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-39页 |
| 主要结论 | 第37-38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第45页 |