| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-19页 |
| ·紫花苜蓿的营养价值 | 第9-10页 |
| ·苜蓿的遗传转化方法 | 第10-13页 |
| ·农杆菌介导法 | 第10-11页 |
| ·基因枪转化法 | 第11-12页 |
| ·电击法 | 第12页 |
| ·花粉管通道法 | 第12-13页 |
| ·农杆菌介导苜蓿遗传转化的研究 | 第13-16页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化过程和机理 | 第13-14页 |
| ·农杆菌介导苜蓿遗传转化的影响因素 | 第14-16页 |
| ·基因型的影响 | 第14页 |
| ·农杆菌菌株的影响 | 第14-15页 |
| ·转化受体材料的影响 | 第15页 |
| ·外源添加物的影响 | 第15-16页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第16-19页 |
| ·标记基因 | 第16-17页 |
| ·转基因植株分子检测 | 第17-18页 |
| ·PCR检测 | 第17页 |
| ·分子杂交 | 第17-18页 |
| ·免疫技术 | 第18页 |
| ·生理生化检测 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 试验一 紫花苜蓿直接分化芽再生途径的遗传转化 | 第20-32页 |
| ·试验材料 | 第20-21页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·植物表达载体和抗性筛选剂 | 第20页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-25页 |
| ·植物激素的配制 | 第21页 |
| ·抗生素的配制 | 第21-22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·农杆菌工程菌液的制备 | 第22-23页 |
| ·农杆菌介导的转化过程 | 第23-24页 |
| ·外植体的选择和准备 | 第23页 |
| ·农杆菌的侵染 | 第23页 |
| ·共培养 | 第23页 |
| ·不定芽的诱导和筛选 | 第23-24页 |
| ·诱导生根 | 第24页 |
| ·转基因植株的驯化及移栽 | 第24页 |
| ·影响遗传转化效率的因素 | 第24页 |
| ·Kan筛选浓度的确定 | 第24页 |
| ·不同浓度NAA对芽诱导的影响 | 第24页 |
| ·不同浓度YE对根诱导的影响 | 第24页 |
| ·数据计算公式和处理 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-28页 |
| ·Kan筛选浓度的确定 | 第25页 |
| ·不同浓度NAA对芽诱导的影响 | 第25-26页 |
| ·不同浓度YE对根诱导的影响 | 第26-27页 |
| ·遗传转化的全过程 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-31页 |
| ·转基因苜蓿的再生途径 | 第28-29页 |
| ·影响苜蓿子叶节遗传转化效率的因素 | 第29-31页 |
| ·筛选抗生素对苜蓿子叶节遗传转化的影响 | 第29页 |
| ·不同浓度NAA对芽诱导的影响 | 第29-30页 |
| ·不同浓度YE对根诱导的影响 | 第30页 |
| ·再生芽玻璃化问题 | 第30-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 4 试验二 种子萌发早期子叶节的非组织培养遗传转化 | 第32-36页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·植物表达载体和抗性筛选剂 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·仪器设备 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-33页 |
| ·非组培方式的子叶节遗传转化 | 第32-33页 |
| ·农杆菌侵染时间对非组培方式子叶节转化的影响 | 第32-33页 |
| ·转基因植株的开花结实 | 第33页 |
| ·数据计算公式 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-34页 |
| ·农杆菌侵染时间对非组培方式子叶节遗传转化的影响 | 第33页 |
| ·子叶节遗传转化的全过程 | 第33-34页 |
| ·转基因植株的开花结实 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·非组培方式子叶节的遗传转化 | 第34-35页 |
| ·两种苜蓿遗传转化的再生方式的初步比较 | 第35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 5 试验三 转基因苜蓿的分子生物学鉴定 | 第36-44页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·培养基、缓冲液等的配制 | 第36-37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·试验方法 | 第37-41页 |
| ·转基因苜蓿叶片的基因组DNA提取 | 第37-38页 |
| ·转基因苜蓿的PCR检测 | 第38-41页 |
| ·引物设计 | 第38页 |
| ·PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR产物切胶回收 | 第39-40页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第40页 |
| ·连接产物转化到感受态细胞 | 第40页 |
| ·重组质粒的蓝白斑筛选 | 第40页 |
| ·重组质粒的菌液PCR检测 | 第40-41页 |
| ·克隆序列的测序 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·转基因苜蓿DNA的提取结果 | 第41页 |
| ·PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组克隆载体的菌液PCR鉴定 | 第42页 |
| ·重组克隆载体的序列测定结果 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 6 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-56页 |
| ABSTRACT | 第56-58页 |
| 附录 | 第58页 |