| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-18页 |
| ·苜蓿的特点 | 第10页 |
| ·高温对紫花苜蓿生长发育的影响 | 第10-11页 |
| ·高温对紫花苜蓿生长和产量的影响 | 第10-11页 |
| ·紫花苜蓿的耐热性 | 第11页 |
| ·高温对苜蓿病虫害的影响 | 第11页 |
| ·高温胁迫机理 | 第11-12页 |
| ·渗透调节作用 | 第12页 |
| ·过氧化作用 | 第12页 |
| ·热应激蛋白 | 第12-13页 |
| ·热应激蛋白功能 | 第12-13页 |
| ·小分子热激蛋白 | 第13页 |
| ·苜蓿分子生物学研究 | 第13-14页 |
| ·苜蓿分子生物学国内外研究进展 | 第13-14页 |
| ·部分克隆出基因全长的高温胁迫诱导基因 | 第14页 |
| ·差异基因的筛选与验证 | 第14-15页 |
| ·抑制性消减杂交技术 | 第14页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第14-15页 |
| ·基因工程 | 第15-17页 |
| ·目的基因分离和鉴定 | 第15-16页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第16页 |
| ·植物细胞的遗传转化 | 第16-17页 |
| ·转化植物细胞的筛选及转基因植物的鉴定 | 第17页 |
| ·转基因苜蓿的发展和应用前景 | 第17页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 引言 | 第18-19页 |
| 3 试验一 紫花苜蓿中HSP18.2和ct-sHSP基因的热应激表达量检测 | 第19-26页 |
| ·材料与方法 | 第19-22页 |
| ·试验材料 | 第19-20页 |
| ·试验方法 | 第20-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-24页 |
| ·总RNA提取 | 第22-23页 |
| ·荧光定量结果 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-26页 |
| 4 试验二 HSP18.2和ct-sHSP基因的过表达载体构建 | 第26-36页 |
| ·材料与方法 | 第26-32页 |
| ·试验材料 | 第26-28页 |
| ·试验方法 | 第28-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·HSP18.2和ct-sHSP克隆PCR扩增效果 | 第32-33页 |
| ·PMD18-T载体与目的片段连接的PCR检测 | 第33页 |
| ·酶切效果与分析 | 第33-34页 |
| ·重组质粒PCR检测 | 第34-35页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 5 试验三 农杆菌介导转化苜蓿植株 | 第36-46页 |
| ·材料与方法 | 第36-43页 |
| ·试验材料 | 第36-40页 |
| ·试验方法 | 第40-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·无菌苗生长 | 第43页 |
| ·诱导芽生长 | 第43页 |
| ·诱导根生长 | 第43-44页 |
| ·再生植株移栽与成长 | 第44页 |
| ·苜蓿再生植株阳性率鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 6 讨论与结论 | 第46-50页 |
| ·苜蓿总RNA提取 | 第46-47页 |
| ·荧光定量PCR试验 | 第47页 |
| ·构建过表达载体 | 第47-48页 |
| ·农杆菌中表达载体的鉴定 | 第48页 |
| ·农杆菌介导转化苜蓿植株 | 第48页 |
| ·阳性苗鉴定 | 第48页 |
| ·结论 | 第48-50页 |
| 7 展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| ABSTRACT | 第56-57页 |
