| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一部分 SUR79M2 体外刺激健康人外周血单个核细胞及流式检测 TCRVΒ亚家族表达谱 | 第15-23页 |
| 引言 | 第15页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·样本 | 第15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·仪器 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-18页 |
| ·实验样本采集 | 第16页 |
| ·健康人外周血白膜 HLA 分型检测 | 第16-17页 |
| ·健康人外周血白膜淋巴细胞的分离 | 第17页 |
| ·DC 细胞的诱导 | 第17页 |
| ·DC 细胞表型分析 | 第17-18页 |
| ·DC 细胞负载 Sur79M2 并刺激 T 淋巴细胞 | 第18页 |
| ·流式细胞仪检测体外 Sur79M2 刺激后 T 淋巴细胞中 TCRVβ亚家族表达情况 | 第18页 |
| ·结果 | 第18-22页 |
| ·流式检测健康人白膜样本 HLA 型别 | 第18-19页 |
| ·DC 细胞形态学观察 | 第19-20页 |
| ·流式检测成熟细胞表型 | 第20-21页 |
| ·流式细胞仪检测体外 Sur79M2 刺激后 T 淋巴细胞中 TCRVβ亚家族表达情况 | 第21-22页 |
| ·小结 | 第22-23页 |
| 第二部分 GEXP 检测 TCRVΑ、Β链基因表达情况 | 第23-32页 |
| 引言 | 第23页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·Gexp 检测体外 Sur79M2 刺激后 T 淋巴细胞中 TCRVα、β链基因表达情况 | 第23-27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·Gexp 检测体外 Sur79M2 刺激后 T 淋巴细胞中 TCRVα、β链基因表达情况 | 第27-31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| 第三部分 TCRVΑ4、VΒ7 基因克隆及 P315-TCRVΑ4-IRES-VΒ7 双表达穿梭载体构建 | 第32-45页 |
| 引言 | 第32页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·质粒、菌株、试剂 | 第32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-39页 |
| ·获得 TCRVα4、Vβ7 基因 | 第32-34页 |
| ·胶回收 PCR 产物连接 T 载体 | 第34-35页 |
| ·质粒转化及质粒提取 | 第35-36页 |
| ·构建 p315-TCRva4-IRES-vb7 双表达穿梭载体 | 第36-39页 |
| ·结果 | 第39-44页 |
| ·获取 TCRVα4 、Vβ7 基因 | 第39页 |
| ·TCRVα4 、Vβ7 基因连接 T 载体测序结果 | 第39-41页 |
| ·构建 p315-TCRVα4-IRES-Vβ7 双表达穿梭载体结果 | 第41-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第四部分 重组嵌合型腺病毒 AD5/F35 的包装、鉴定以及滴度测定 | 第45-51页 |
| 引言 | 第45页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·质粒、细胞和试剂 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. p315-TCRVα4-IRES-Vβ7 的包装 | 第45-46页 |
| ·重组嵌合型腺病毒鉴定 | 第46-48页 |
| ·结果 | 第48-50页 |
| ·HEK-293 细胞包装腺病毒 | 第48页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. TCR Vβ 7 的 PCR 鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35.p315-TCR Vα4-IRES-TCR Vβ7 流式鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35 p315-TCRVα4-IRES-Vβ7 扩大培养 | 第50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第五部分 SUR79M2 优势取用基因 TCR VΑ4、VΒ7 重组腺病毒抗瘤谱 | 第51-59页 |
| 引言 | 第51页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·细胞、试剂 | 第51页 |
| ·仪器 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-53页 |
| ·检测肿瘤细胞株中 HLA 分型及 survivin 表达情况 | 第51-52页 |
| ·MTT 比色法检测 survivin 抗原肽优势取用基因 TCR Vα4、Vβ7 重组腺病毒对肿瘤细胞的杀伤效果 | 第52-53页 |
| ·Elisa 试剂盒检测 IFN-γ的释放 | 第53页 |
| ·结果 | 第53-57页 |
| ·肿瘤细胞株中 HLA 分型及 survivin 表达情况 | 第53-55页 |
| ·MTT 比色法检测 Sur79M2 优势取用基因 TCRva4、vb7 重组腺病毒对肿瘤细胞的杀伤效果 | 第55-56页 |
| ·IFN-γ的释放检测结果 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 讨论 | 第59-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第70-71页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第71-74页 |
| 附录三 引物列表 | 第74-76页 |
| 附录四 攻读学位期间发表的论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
