| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 第一部分 GeXP 多重基因分析系统检测人 TRBV 亚家族 CDR3 谱系方法的建立 | 第19-42页 |
| 引言 | 第19页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·实验样本 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-32页 |
| ·实验标本的收集 | 第21页 |
| ·单核细胞的分离 | 第21页 |
| ·GeXP 多重基因检测系统检测人淋巴细胞 TCRVβ亚家族方法建立 | 第21-25页 |
| ·RT-mPCR 条件的优化 | 第25-27页 |
| ·GeXP 检测系统的检验 | 第27-32页 |
| ·结果 | 第32-40页 |
| ·管家基因 GAPDH RT 引物的优化 | 第32-34页 |
| ·内参基因 KanR 加入模版浓度的优化 | 第34-35页 |
| ·阳性质粒模版的构建 | 第35-36页 |
| ·单引物多模板扩增特异性 | 第36-37页 |
| ·多引物多模板扩增的特异性 | 第37-38页 |
| ·健康人 PBMC TCR Vβ亚家族 GeXP 检测 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-42页 |
| 第二部分 GeXP 多重基因分析系统检测人 TRAV 亚家族 CDR3 谱系的方法建立 | 第42-52页 |
| 前言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·实验样本 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·实验标本的收集 | 第42-43页 |
| ·单核细胞的分离 | 第43页 |
| ·GeXP 多重基因检测系统检测人淋巴细胞 TCRVα家族 CDR3 谱系的方法建立 | 第43-46页 |
| ·GeXP 检测系统的检验 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-51页 |
| ·单引物扩增的特异性 | 第47-48页 |
| ·健康人 PBMC TCR Vα亚家族 GeXP 检测 | 第48-51页 |
| ·小结 | 第51-52页 |
| 第三部分 肺癌患者胸水 TIL 中 TCR 家族 CDR3 谱型的初步分析 | 第52-58页 |
| 前言 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·实验样本 | 第52-53页 |
| ·实验试剂 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·实验标本的收集 | 第53页 |
| ·RNA 的提取 | 第53页 |
| ·第一链 cDNA 的合成 | 第53页 |
| ·多重 PCR 分别扩增病人胸水中 TIL 中 TCR Vα和 TCR Vβ的 CDR3 片段 | 第53-54页 |
| ·GeXP 上机检测 | 第54页 |
| ·寡克隆增殖亚家族 CDR3 片段序列分析 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-57页 |
| ·肺癌患者胸水中 TIL 中 TCR Vα和 TCR Vβ的 CDR3 谱型 GeXP 分析 | 第55-56页 |
| ·5 例肺癌病人胸水 TIL 中 TCR Vα和 TCR Vβ家族寡克隆或单克隆测序 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四部分 pDC315-AV5-AJ27-IRES-BV17-BJ2.1 双表达载体的构建 | 第58-70页 |
| 引言 | 第58页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·质粒、菌株、试剂 | 第58-59页 |
| ·仪器 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-65页 |
| ·TCR Vα5 、TCR Vβ17 基因的获取 | 第59-61页 |
| ·胶回收 PCR 产物连接 T 载体 | 第61页 |
| ·质粒转化及质粒提取 | 第61-62页 |
| ·构建 pDC315-AV5-AJ27-IRES-BV17-BJ2.1 双表达穿梭载体 | 第62-65页 |
| ·结果 | 第65-69页 |
| ·获取 TCR Vα5 、TCR Vβ17 基因 | 第65-66页 |
| ·TCR Vα5 、TCR Vβ17 基因连接 T 载体测序结果 | 第66页 |
| ·构建 pDC315-AV5-AJ27-IRES-BV17-BJ2.1 双表达穿梭载体结果 | 第66-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第五部分 重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35 的包装、鉴定以及滴度测定和 TCR Vβ17、TCR Vα5 重组腺病毒的抗瘤谱 | 第70-78页 |
| 引言 | 第70页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·质粒、细胞和试剂 | 第70页 |
| ·仪器 | 第70页 |
| ·方法 | 第70-73页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35，pDC315-AV5-AJ27-IRES-BV17-BJ2.1 的包装 | 第70-71页 |
| ·重组嵌合型腺病毒鉴定 | 第71-73页 |
| ·重组腺病毒抗瘤谱 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-77页 |
| ·HEK-293 细胞包装腺病毒 | 第73-74页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. TCR Vβ17 的 PCR 鉴定 | 第74页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35. pDC315-AV5-AJ27-IRES-BV17-BJ2.1 流式鉴定 | 第74-75页 |
| ·重组嵌合型腺病毒 Ad5/F35 pDC315-AV5-AJ27-IRES-BV17-BJ2.1 扩大培养 | 第75页 |
| ·肿瘤细胞株中 HLA 分型 | 第75-76页 |
| ·MTT 比色法检基因 TCR Vα5、Vβ17 重组腺病毒对肿瘤细胞的杀伤效果 | 第76-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 讨论 | 第78-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第89-90页 |
| 附录二 质粒图谱 | 第90-92页 |
| 附录三 攻读学位期间发表的论文 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
