| 中文摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-18页 |
| 1 前言 | 第12页 |
| 2 目前针对 EGFR 过表达恶性肿瘤的靶向治疗及存在的缺陷 | 第12-13页 |
| 3 “二聚化靶向”策略 | 第13-14页 |
| 4 主动免疫发展概况 | 第14-17页 |
| 5 本课题的研究基础及内容 | 第17-18页 |
| 第2章 EGFR 二聚化靶向多肽疫苗的设计与制备 | 第18-46页 |
| 1 前言 | 第18-19页 |
| 2 实验材料 | 第19-23页 |
| ·基因模板来源 | 第19页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·引物序列 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·溶液的配制 | 第21-23页 |
| 3 实验方法 | 第23-30页 |
| ·重组抗原 MVF-E 的制备 | 第23-24页 |
| ·MVF-E 基因的获得 | 第23页 |
| ·MVF-E 蛋白诱导表达 | 第23-24页 |
| ·MVF-E 表达产物纯化 | 第24页 |
| ·化学偶联抗原 P64K*E 与 P64K*MVF-E 的制备 | 第24-29页 |
| ·多肽片段 E 与 MVF-E 的获得 | 第24页 |
| ·基因工程方法制备 P64k 载体 | 第24-28页 |
| ·戊二醛法制备偶联抗原 P64K*E 与 P64K*MVF-E | 第28-29页 |
| ·重组抗原 P64K-E 与 E-P64K 的制备 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白诱导表达 | 第29页 |
| ·镍柱亲和层析纯化重组蛋白 | 第29-30页 |
| 4 实验结果 | 第30-43页 |
| ·抗原肽设计 | 第30-32页 |
| ·重组抗原肽的构建 | 第30页 |
| ·偶联抗原肽的构建 | 第30-32页 |
| ·重组抗原 MVF-E 的制备与鉴定 | 第32-36页 |
| ·MVF-E 的原核构建表达形式构建 | 第32-33页 |
| ·MVF-E 的表达形式分析 | 第33页 |
| ·MVF-E 表达产物的分离纯化与鉴定 | 第33-36页 |
| ·化学偶联抗原 P64K*E 与 P64K*MVF-E 的制备 | 第36-42页 |
| ·PCR 扩增目的基因 P64K 及其鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组 P64K 蛋白表达形式分析 | 第37-38页 |
| ·P64K 蛋白纯度及收率 | 第38-39页 |
| ·偶联抗原 P64K*E 与 P64K*MVF-E | 第39-42页 |
| ·重组抗原 P64K-E 与 E-P64K 的获得 | 第42-43页 |
| 5 讨论 | 第43-45页 |
| 6 小结 | 第45-46页 |
| 第3章 抗原肽的免疫原性分析及体内抑瘤活性分析 | 第46-61页 |
| 1 前言 | 第46页 |
| 2 实验材料 | 第46-49页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·实验动物 | 第46-47页 |
| ·主要试剂设备 | 第47页 |
| ·主要试剂的配制 | 第47-49页 |
| 3 实验方法 | 第49-52页 |
| ·分组与给药 | 第49页 |
| ·LLC 肺癌皮下移植瘤模型建立 | 第49-50页 |
| ·抗原表位肽免疫原性分析 | 第50-51页 |
| ·小鼠血清的采集 | 第50页 |
| ·ELISA 检测小鼠血清中的抗体滴度 | 第50-51页 |
| ·观察指标 | 第51页 |
| ·成瘤率及生存情况 | 第51页 |
| ·肿瘤生长情况 | 第51页 |
| ·肿瘤瘤重及抑瘤率 | 第51页 |
| ·肺转移节节点数及主要免疫脏器的影响 | 第51页 |
| ·统计学分析 | 第51-52页 |
| 4 实验结果 | 第52-58页 |
| ·免疫原性分析 | 第52-53页 |
| ·致瘤结果 | 第53-54页 |
| ·各组小鼠生存质量 | 第54-55页 |
| ·肿瘤体积及生长曲线 | 第55-56页 |
| ·肿瘤的瘤重及抑瘤率 | 第56-58页 |
| ·小鼠肺转移情况 | 第58页 |
| 5 讨论 | 第58-60页 |
| 6 小结 | 第60-61页 |
| 第4章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文专利及科研成果 | 第68-69页 |
| 附录1 文献综述 | 第69-78页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录2 英文缩写词表 | 第78-80页 |
| 附录3 核酸及氨基酸序列 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
