| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| ·生物乙醇发展现状 | 第10-11页 |
| ·甘油的生物转化 | 第11-14页 |
| ·微生物对甘油的利用 | 第11-12页 |
| ·以甘油为底物生产乙醇 | 第12-14页 |
| ·木糖-乙醇的生物转化 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母利用木糖菌株构建 | 第15-20页 |
| ·代谢工程方法 | 第16-17页 |
| ·进化工程方法 | 第17-18页 |
| ·基因组重排与有性重组 | 第18-20页 |
| ·本文的研究背景、内容及目的 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第21-44页 |
| ·实验材料 | 第21-29页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第21-25页 |
| ·实验仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·主要溶液 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第29-30页 |
| ·小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB 法） | 第30页 |
| ·酵母染色体的快速分离 | 第30页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第30-31页 |
| ·DNA 的限制酶消化 | 第31-32页 |
| ·DNA 的连接反应 | 第32页 |
| ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·Klenow 酶补平失活酶切位点 | 第32-33页 |
| ·酿酒酵母总 RNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR） | 第34-35页 |
| ·酵母细胞的转化 | 第35-36页 |
| ·酵母交配型的验证 | 第36页 |
| ·不同交配型酵母细胞之间的杂交 | 第36页 |
| ·HO 质粒构建二倍体细胞 | 第36-37页 |
| ·一步基因置换法 | 第37-38页 |
| ·两步基因置换 | 第38页 |
| ·酵母等位基因分离及遗传分析 | 第38-39页 |
| ·酵母 EMS 诱变 | 第39-40页 |
| ·酵母高效生孢法 | 第40页 |
| ·孢子纯化方法 | 第40页 |
| ·进化工程筛选 | 第40-41页 |
| ·蛋白浓度定量 | 第41页 |
| ·酿酒酵母总蛋白提取 | 第41-42页 |
| ·细胞干重测定 | 第42页 |
| ·酶活测定 | 第42页 |
| ·发酵过程的准备及结果分析方法 | 第42-44页 |
| ·发酵过程 | 第42-43页 |
| ·HPLC 测定发酵结果各组分 | 第43-44页 |
| 第三章 过表达甘油利用基因菌株构建及发酵性能分析 | 第44-57页 |
| ·概述 | 第44页 |
| ·质粒的构建 | 第44-48页 |
| ·GPD2 启动子过表达 noxE 基因整合质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·过表达 DAK1 基因整合质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·过表达 DAK2 基因整合质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·过表达 GCY1 基因整合质粒的构建 | 第47-48页 |
| ·甘油利用菌株的构建 | 第48-52页 |
| ·在 LGE73，LGE74 中引入 NADH 氧化酶 noxE | 第48-50页 |
| ·过表达 DAK1 基因的整合 | 第50页 |
| ·过表达 DAK2 基因的整合 | 第50-51页 |
| ·过表达 GCY1 基因的整合 | 第51-52页 |
| ·DAK1,DAK2,GCY1 基因在酿酒酵母菌株中的实际转录强度测定 | 第52-54页 |
| ·工程改造菌株的甘油发酵性能测试 | 第54-56页 |
| ·noxE 基因整合对生长的影响 | 第54页 |
| ·DAK1/DAK2/GCY1 基因过表达后甘油发酵测试 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第四章 PHO13 基因缺失对重组木糖发酵酿酒酵母的影响 | 第57-65页 |
| ·概述 | 第57页 |
| ·PHO13 基因缺失质粒的构建 | 第57-59页 |
| ·基因 PHO13 的缺失 | 第59-60页 |
| ·PHO13 基因缺失对 KAM-6X 发酵能力的影响 | 第60-63页 |
| ·有氧条件下的耗糖和生长速度 | 第60-61页 |
| ·微好氧条件下木糖发酵性能 | 第61-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第五章 有性重组技术改造酿酒酵母高效发酵木糖菌株 | 第65-78页 |
| ·概述 | 第65页 |
| ·KAM-6X(K270R)二倍体菌株中 STE2 基因缺失菌株的构建 | 第65-67页 |
| ·KAM-6X(K270R)菌株二倍体的构建 | 第65-66页 |
| ·二倍体菌株 KAM-6X(K270R)-D 中 STE2 基因缺失 | 第66-67页 |
| ·菌株 EMS 诱变处理 | 第67页 |
| ·最佳 EMS 诱变剂量测试 | 第67页 |
| ·双倍体菌株 KA M-6X(K270R)-DS2 的诱变 | 第67页 |
| ·有性重组介导的基因组重排 | 第67-68页 |
| ·高效生孢 | 第68页 |
| ·孢子纯化 | 第68页 |
| ·进化工程筛选 | 第68-69页 |
| ·突变株的木糖发酵性能测试 | 第69-75页 |
| ·微好氧条件下木糖发酵情况 | 第69-73页 |
| ·混合糖培养基中发酵情况 | 第73-75页 |
| ·突变株中 XR,XDH,XKS 的酶活测定 | 第75-76页 |
| ·突变菌株交配型分析 | 第76-77页 |
| ·本章小结 | 第77-78页 |
| 第六章 总结与展望 | 第78-80页 |
| ·总结 | 第78-79页 |
| ·展望 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文和参加科研情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
