| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·琥珀酸及其衍生物的潜在市场前景及展望 | 第9-12页 |
| ·琥珀酸的理化性质 | 第9页 |
| ·琥珀酸的功能和用途 | 第9-10页 |
| ·琥珀酸衍生物的市场前景及展望 | 第10-12页 |
| ·微生物发酵法生产琥珀酸的研究及其进展 | 第12-14页 |
| ·微生物发酵法生产琥珀酸 | 第12页 |
| ·好氧条件下几种典型的微生物工程菌发酵生产琥珀酸的研究进展 | 第12-14页 |
| ·代谢途径及关键节点和酶的鉴定 | 第14-16页 |
| ·好氧条件下谷氨酸棒杆菌高产琥珀酸菌株的代谢工程改造 | 第16-19页 |
| ·敲除代谢副产物途径，抑制琥珀酸合成途径的竞争途径 | 第17页 |
| ·强化琥珀酸合成途径 | 第17页 |
| ·激活乙醛酸循环途径 | 第17页 |
| ·强化糖运输系统 | 第17-18页 |
| ·琥珀酸运输系统的研究 | 第18-19页 |
| ·底物的扩展利用 | 第19-20页 |
| ·选题背景和研究思路 | 第20-23页 |
| ·选题背景 | 第20-21页 |
| ·研究思路和内容 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-40页 |
| ·实验材料 | 第23-30页 |
| ·菌种和质粒 | 第23-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要溶液的配置 | 第27-29页 |
| ·所用主要培养基的组分及配制 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·引物的设计和基因测序 | 第30页 |
| ·PCR 反应 | 第30-31页 |
| ·DNA 片段的回收和纯化（切胶回收、酶切回收） | 第31-32页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·酶切体系 | 第32-33页 |
| ·去磷酸化体系 | 第33页 |
| ·连接体系 | 第33页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取（碱法） | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第34页 |
| ·谷氨酸棒杆菌质粒 DNA 的提取 | 第34页 |
| ·谷氨酸棒杆菌基因组 DNA 的提取 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌化学转化感受态细胞的制备（CaCl2法） | 第35页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的化学转化 | 第35-36页 |
| ·谷氨酸棒杆菌电转化感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·谷氨酸棒杆菌感受态细胞的电转化 | 第36-37页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第37页 |
| ·分批补料式发酵 | 第37-38页 |
| ·菌株生长的测定 | 第38页 |
| ·葡萄糖的测定 | 第38页 |
| ·L-阿拉伯糖和谷氨酸棒杆菌发酵产物的测定 | 第38-39页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第39页 |
| ·酶活力测定的蛋白抽提 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第40-68页 |
| ·以葡萄糖为底物好氧生产琥珀酸 | 第40-51页 |
| ·敲除基因 sdh 构建好氧生产琥珀酸菌株 | 第40-43页 |
| ·基因 acs 和 acsA 表达载体的构建 | 第43-45页 |
| ·过表达编码柠檬酸合酶的基因 gltA | 第45-47页 |
| ·琥珀酸运输体系（SucE）的构建 | 第47-48页 |
| ·乙酰辅酶 A 合酶和柠檬酸合酶酶活力的测定 | 第48-51页 |
| ·琥珀酸运输蛋白 SucE 的 RT-qPCR | 第51页 |
| ·工程菌的生长和琥珀酸摇瓶发酵表征 | 第51-57页 |
| ·构建谷氨酸棒杆菌好氧生产琥珀酸的平台菌株 | 第51-52页 |
| ·引入乙酸吸收途径 | 第52-54页 |
| ·过表达柠檬酸合酶以减少丙酮酸积累 | 第54-56页 |
| ·琥珀酸输出体系对好氧生产琥珀酸的影响 | 第56-57页 |
| ·好氧条件下用发酵罐分批补料发酵生产琥珀酸 | 第57-59页 |
| ·以 L-阿拉伯糖为底物好氧生产琥珀酸 | 第59-62页 |
| ·阿拉伯糖操纵子 araBAD 表达载体的构建 | 第59-60页 |
| ·乙酰辅酶 A 合成酶和柠檬酸合酶的共表达 | 第60页 |
| ·阿拉伯糖运输基因 araE 表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·工程菌的生长和琥珀酸摇瓶发酵表征 | 第62-68页 |
| ·谷氨酸棒杆菌 WT（pXaraBAD）利用 L-阿拉伯糖的情况 | 第62页 |
| ·菌株△sdh（pXaraBAD）以 L-阿拉伯糖为底物好氧生产琥珀酸 | 第62-63页 |
| ·菌株 ZX1（pXaraBAD）以 L-阿拉伯糖为底物好氧生产琥珀酸 | 第63-64页 |
| ·共表达乙酰-CoA 合成酶和柠檬酸合酶 | 第64-66页 |
| ·好氧条件下菌株 ZX1（pXaraBAD，pEacsAgltA）共利用 L-阿拉伯糖和D-葡萄糖为底物生产琥珀酸的研究 | 第66-68页 |
| 第四章 结论与展望 | 第68-70页 |
| ·结论 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
