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黄瓜表皮毛相关基因的定位、同源克隆与功能研究

符号说明第1-12页
中文摘要第12-14页
Abstract第14-17页
1 前言第17-32页
   ·研究目的及意义第17页
   ·国内外研究进展第17-30页
     ·黄瓜表皮毛及果刺研究进展第17-20页
     ·其他植物表皮毛研究进展第20-23页
     ·分子标记技术及其在黄瓜研究上的应用第23-27页
     ·数字基因表达谱及其在黄瓜研究上的应用第27-28页
     ·植物中 R2R3MYB,bHLH,WD40-repeat 及 R3 single repeat MYB 家族的研究进展第28-30页
   ·研究内容及技术路线第30-32页
     ·研究内容第30-31页
     ·技术路线第31-32页
2 材料与方法第32-56页
   ·试验材料第32-33页
     ·植物材料第32页
     ·菌株及质粒第32页
     ·酶及生化制剂第32页
     ·PCR 引物第32-33页
     ·组织培养培养基第33页
   ·试验方法第33-56页
     ·基因定位第33-36页
       ·材料种植第33页
       ·定位群体的选择第33页
       ·定位群体基因组 DNA 的提取(TPS 法)第33-34页
       ·SSR 分析第34-35页
       ·CAPS 和 STS 标记分析第35-36页
     ·数字基因表达谱分析第36-40页
       ·材料种植第36页
       ·样品制备及 RNA 的提取第36-37页
       ·表达谱测序试验流程第37页
       ·Tag 制备的原理和步骤第37-38页
       ·数据处理第38页
       ·基因表达注释第38页
       ·差异表达基因的筛选第38-39页
       ·Gene Ontology 功能显著性富集分析第39页
       ·Real-time PCR 验证差异表达基因第39-40页
     ·同源基因的搜索及序列分析第40页
       ·黄瓜基因组中 AtGL1,AtGL3,AtTTG1 及 AtTRY 的同源基因的搜索第40页
       ·结构域及基因结构的分析第40页
     ·黄瓜基因组内 R2R3MYB,bHLH,WDR 和 R3 single repeat MYB 家族的生物信息学分析第40-42页
       ·R2R3MYB第40-41页
       ·bHLH 家族第41-42页
       ·WDR 家族第42页
       ·R3 single repeat MYB 家族第42页
     ·基因克隆和载体构建第42-49页
       ·RNA 提取及 cDNA 的合成第42-43页
       ·基因扩增第43页
       ·PCR 产物的回收第43-44页
       ·与克隆载体连接第44页
       ·大肠杆菌感受态 DH5 制备与转化第44-45页
       ·DNA 序列测定第45页
       ·质粒 DNA 的提取第45-46页
       ·质粒浓度的测定第46页
       ·过表达载体的构建第46-47页
       ·RNAi 表达载体的构建第47-48页
       ·GUS 表达载体的构建第48页
       ·亚细胞定位载体的构建第48-49页
     ·亚细胞定位分析第49-51页
       ·SDS 碱裂解法中量制备质粒 DNA第49-50页
       ·基因枪法转化洋葱表皮细胞第50-51页
     ·组织特异性分析第51-52页
     ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备与转化第52-53页
       ·农杆菌感受态制备第52-53页
       ·电击法转化农杆菌第53页
     ·蘸花法转化拟南芥第53-54页
       ·拟南芥的培养第53页
       ·蘸花法侵染拟南芥花序第53-54页
       ·转基因阳性植株的检测第54页
       ·拟南芥表皮毛拍照及表皮毛统计第54页
     ·黄瓜遗传转化及转基因植株的 PCR 验证第54-56页
       ·黄瓜的遗传转化第54-55页
       ·转基因植株的 PCR 检测第55页
       ·扫描电镜分析转基因植株表型第55-56页
3 结果与分析第56-103页
   ·无毛基因(gl1)的定位第56-63页
     ·gl1 基因的初步定位第56-58页
     ·无毛基因 gl1 的精细定位第58-63页
   ·目标区间内候选基因分析第63-65页
     ·gl1 候选基因的生物信息学分析第63-65页
     ·gl1 候选基因的筛选第65页
   ·无毛突变体及“大青把”叶片的数字基因表达谱分析第65-74页
     ·“大青把”及无毛突变体叶片 RNA 的检测第65-66页
     ·Solexa 高通量测序质量评估第66页
     ·Clean Tags 拷贝数分布统计第66-67页
     ·测序饱和度的分析第67-68页
     ·差异表达基因分析第68-70页
     ·Gene Ontology 功能富集分析第70-71页
     ·Solexa 高通量测序结果的验证第71-74页
   ·黄瓜表皮毛形成相关基因的同源克隆、生物信息学分析及功能研究第74-103页
     ·黄瓜表皮毛形成相关基因的同源搜索第74页
     ·Csa5M148680, Csa6M003480, Csa4M097650 及 Csa5M139610 的基因结构及保守结构域分析第74页
     ·黄瓜基因组中 R2R3MYB,bHLH,WDR 及 R3 single repeat MYB 家族同源进化分析第74-89页
     ·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的克隆及过表达载体的构建第89-90页
     ·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY- RNAi 表达载体的构建第90-92页
     ·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的启动子的克隆、分析及 GUS 载体的构建第92-93页
     ·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的亚细胞定位分析第93-95页
     ·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的组织表达特异性分析第95-96页
     ·CsGL1L,CsMYC1 及 CsTTG1 在拟南芥中的过表达及转基因拟南芥的表型分析第96-99页
     ·黄瓜的遗传转化及转基因植株的 PCR 鉴定第99-103页
       ·CsMYC1 过表达转基因植株的 PCR 鉴定第99-100页
       ·CsTTG1 过表达转基因植株的 PCR 鉴定第100页
       ·CsTTG1 过表达转基因植株的表型分析第100-103页
4. 讨论第103-109页
   ·无毛基因 gl1 的定位第103-105页
     ·定位群体的构建第103-104页
     ·定位标记的选择第104-105页
     ·候选基因的筛选第105页
   ·表达谱分析第105-106页
   ·黄瓜基因组中 R2R3MYB,bHLH,WDR 及 R3 single repeat MYB 家族的生物信息学分析第106页
   ·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的功能研究第106-109页
     ·CsGL1L第106-107页
     ·CsMYC1第107页
     ·CsTTG1第107-108页
     ·CsTRY第108-109页
5 结论第109-110页
6 参考文献第110-128页
7 附录第128-147页
8 致谢第147-148页
9 攻读学位期间发表论文情况第148页

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