符号说明 | 第1-12页 |
中文摘要 | 第12-14页 |
Abstract | 第14-17页 |
1 前言 | 第17-32页 |
·研究目的及意义 | 第17页 |
·国内外研究进展 | 第17-30页 |
·黄瓜表皮毛及果刺研究进展 | 第17-20页 |
·其他植物表皮毛研究进展 | 第20-23页 |
·分子标记技术及其在黄瓜研究上的应用 | 第23-27页 |
·数字基因表达谱及其在黄瓜研究上的应用 | 第27-28页 |
·植物中 R2R3MYB,bHLH,WD40-repeat 及 R3 single repeat MYB 家族的研究进展 | 第28-30页 |
·研究内容及技术路线 | 第30-32页 |
·研究内容 | 第30-31页 |
·技术路线 | 第31-32页 |
2 材料与方法 | 第32-56页 |
·试验材料 | 第32-33页 |
·植物材料 | 第32页 |
·菌株及质粒 | 第32页 |
·酶及生化制剂 | 第32页 |
·PCR 引物 | 第32-33页 |
·组织培养培养基 | 第33页 |
·试验方法 | 第33-56页 |
·基因定位 | 第33-36页 |
·材料种植 | 第33页 |
·定位群体的选择 | 第33页 |
·定位群体基因组 DNA 的提取(TPS 法) | 第33-34页 |
·SSR 分析 | 第34-35页 |
·CAPS 和 STS 标记分析 | 第35-36页 |
·数字基因表达谱分析 | 第36-40页 |
·材料种植 | 第36页 |
·样品制备及 RNA 的提取 | 第36-37页 |
·表达谱测序试验流程 | 第37页 |
·Tag 制备的原理和步骤 | 第37-38页 |
·数据处理 | 第38页 |
·基因表达注释 | 第38页 |
·差异表达基因的筛选 | 第38-39页 |
·Gene Ontology 功能显著性富集分析 | 第39页 |
·Real-time PCR 验证差异表达基因 | 第39-40页 |
·同源基因的搜索及序列分析 | 第40页 |
·黄瓜基因组中 AtGL1,AtGL3,AtTTG1 及 AtTRY 的同源基因的搜索 | 第40页 |
·结构域及基因结构的分析 | 第40页 |
·黄瓜基因组内 R2R3MYB,bHLH,WDR 和 R3 single repeat MYB 家族的生物信息学分析 | 第40-42页 |
·R2R3MYB | 第40-41页 |
·bHLH 家族 | 第41-42页 |
·WDR 家族 | 第42页 |
·R3 single repeat MYB 家族 | 第42页 |
·基因克隆和载体构建 | 第42-49页 |
·RNA 提取及 cDNA 的合成 | 第42-43页 |
·基因扩增 | 第43页 |
·PCR 产物的回收 | 第43-44页 |
·与克隆载体连接 | 第44页 |
·大肠杆菌感受态 DH5 制备与转化 | 第44-45页 |
·DNA 序列测定 | 第45页 |
·质粒 DNA 的提取 | 第45-46页 |
·质粒浓度的测定 | 第46页 |
·过表达载体的构建 | 第46-47页 |
·RNAi 表达载体的构建 | 第47-48页 |
·GUS 表达载体的构建 | 第48页 |
·亚细胞定位载体的构建 | 第48-49页 |
·亚细胞定位分析 | 第49-51页 |
·SDS 碱裂解法中量制备质粒 DNA | 第49-50页 |
·基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第50-51页 |
·组织特异性分析 | 第51-52页 |
·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第52-53页 |
·农杆菌感受态制备 | 第52-53页 |
·电击法转化农杆菌 | 第53页 |
·蘸花法转化拟南芥 | 第53-54页 |
·拟南芥的培养 | 第53页 |
·蘸花法侵染拟南芥花序 | 第53-54页 |
·转基因阳性植株的检测 | 第54页 |
·拟南芥表皮毛拍照及表皮毛统计 | 第54页 |
·黄瓜遗传转化及转基因植株的 PCR 验证 | 第54-56页 |
·黄瓜的遗传转化 | 第54-55页 |
·转基因植株的 PCR 检测 | 第55页 |
·扫描电镜分析转基因植株表型 | 第55-56页 |
3 结果与分析 | 第56-103页 |
·无毛基因(gl1)的定位 | 第56-63页 |
·gl1 基因的初步定位 | 第56-58页 |
·无毛基因 gl1 的精细定位 | 第58-63页 |
·目标区间内候选基因分析 | 第63-65页 |
·gl1 候选基因的生物信息学分析 | 第63-65页 |
·gl1 候选基因的筛选 | 第65页 |
·无毛突变体及“大青把”叶片的数字基因表达谱分析 | 第65-74页 |
·“大青把”及无毛突变体叶片 RNA 的检测 | 第65-66页 |
·Solexa 高通量测序质量评估 | 第66页 |
·Clean Tags 拷贝数分布统计 | 第66-67页 |
·测序饱和度的分析 | 第67-68页 |
·差异表达基因分析 | 第68-70页 |
·Gene Ontology 功能富集分析 | 第70-71页 |
·Solexa 高通量测序结果的验证 | 第71-74页 |
·黄瓜表皮毛形成相关基因的同源克隆、生物信息学分析及功能研究 | 第74-103页 |
·黄瓜表皮毛形成相关基因的同源搜索 | 第74页 |
·Csa5M148680, Csa6M003480, Csa4M097650 及 Csa5M139610 的基因结构及保守结构域分析 | 第74页 |
·黄瓜基因组中 R2R3MYB,bHLH,WDR 及 R3 single repeat MYB 家族同源进化分析 | 第74-89页 |
·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的克隆及过表达载体的构建 | 第89-90页 |
·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY- RNAi 表达载体的构建 | 第90-92页 |
·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的启动子的克隆、分析及 GUS 载体的构建 | 第92-93页 |
·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的亚细胞定位分析 | 第93-95页 |
·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的组织表达特异性分析 | 第95-96页 |
·CsGL1L,CsMYC1 及 CsTTG1 在拟南芥中的过表达及转基因拟南芥的表型分析 | 第96-99页 |
·黄瓜的遗传转化及转基因植株的 PCR 鉴定 | 第99-103页 |
·CsMYC1 过表达转基因植株的 PCR 鉴定 | 第99-100页 |
·CsTTG1 过表达转基因植株的 PCR 鉴定 | 第100页 |
·CsTTG1 过表达转基因植株的表型分析 | 第100-103页 |
4. 讨论 | 第103-109页 |
·无毛基因 gl1 的定位 | 第103-105页 |
·定位群体的构建 | 第103-104页 |
·定位标记的选择 | 第104-105页 |
·候选基因的筛选 | 第105页 |
·表达谱分析 | 第105-106页 |
·黄瓜基因组中 R2R3MYB,bHLH,WDR 及 R3 single repeat MYB 家族的生物信息学分析 | 第106页 |
·CsGL1L,CsMYC1, CsTTG1 及 CsTRY 的功能研究 | 第106-109页 |
·CsGL1L | 第106-107页 |
·CsMYC1 | 第107页 |
·CsTTG1 | 第107-108页 |
·CsTRY | 第108-109页 |
5 结论 | 第109-110页 |
6 参考文献 | 第110-128页 |
7 附录 | 第128-147页 |
8 致谢 | 第147-148页 |
9 攻读学位期间发表论文情况 | 第148页 |