| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第11-13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第11-12页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的分类 | 第12-13页 |
| ·苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白 | 第13-15页 |
| ·杀虫晶体蛋白的分类和结构 | 第13-14页 |
| ·杀虫晶体蛋白的作用机制 | 第14-15页 |
| ·丝氨酸蛋白激酶相关研究 | 第15-17页 |
| ·蛋白激酶简介 | 第15-16页 |
| ·枯草芽胞杆菌中prkA基因的鉴定 | 第16页 |
| ·人体病原菌李斯特菌的丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶PrkAc | 第16-17页 |
| ·蛋白功能研究的相关技术 | 第17-22页 |
| ·研究蛋白互作的几种方法 | 第17-19页 |
| ·细菌双杂交技术 | 第17-18页 |
| ·GST pull-down技术 | 第18-19页 |
| ·噬茵体展示技术 | 第19页 |
| ·等离子共振技术 | 第19页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第19页 |
| ·双向电泳技术 | 第19-21页 |
| ·蛋白质的质谱鉴定 | 第21-22页 |
| ·本课题的立题背景及研究的目的意义 | 第22-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌株和质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基的配制及主要成分 | 第25页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第25-26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26-30页 |
| ·常用试剂 | 第26页 |
| ·常用缓冲液和溶液 | 第26-29页 |
| ·质粒抽提、感受态细胞制备试剂配方 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌蛋白表达、纯化及浓度测定试剂配方 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE试剂配方 | 第27-28页 |
| ·双向电泳试剂配方 | 第28-29页 |
| ·常用仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·质粒与总DNA的抽提 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第30页 |
| ·苏云金芽胞杆菌质粒的抽提 | 第30-31页 |
| ·苏云金芽胞杆菌总DNA的抽提 | 第31页 |
| ·分子克隆相关实验操作 | 第31-33页 |
| ·PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32-33页 |
| ·过表达实验相关操作 | 第33-34页 |
| ·过表达质粒的构建 | 第33页 |
| ·过表达质粒电转化YBT-881 | 第33页 |
| ·苏云金芽胞杆菌生长曲线的绘制 | 第33-34页 |
| ·蛋白互作相关实验 | 第34-39页 |
| ·PrkA与Sigma54的互作验证 | 第34页 |
| ·GST-PrkA蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·寻找与GST-PrkA互作的蛋白 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE操作 | 第35-36页 |
| ·双向电泳实验操作 | 第36-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-55页 |
| ·prkA基因的生物信息学分析 | 第39-40页 |
| ·prkA基因的操纵子预测 | 第39页 |
| ·prkA上下游基因分析 | 第39-40页 |
| ·过表达Bt菌株和野生株的生理特性比较 | 第40-45页 |
| ·过表达Bt菌株的构建 | 第40-42页 |
| ·YBT-881PHTPrkA和YBT-881PHT1K生长特性比较 | 第42页 |
| ·YBT-881PHTPrkA和YBT-881PHT1K生理特性比较 | 第42-45页 |
| ·YBT-881PHTPrkA和YBT-881PHT1K的SDS-PAGE分析 | 第42-43页 |
| ·YBT-881PHTPrkA和YBT-881PHT1K菌液沉降比较 | 第43页 |
| ·YBT-881PHTPrkA和YBT-881PHT1K菌体细胞的显微观察 | 第43-45页 |
| ·寻找与PrkA互作的蛋白 | 第45-55页 |
| ·PrkA与Sigma54的互作验证 | 第45-49页 |
| ·pull-down技术验证PrkA与Sigma54的互作 | 第45-47页 |
| ·细菌双杂交验证PrkA与Sigma54的互作 | 第47-49页 |
| ·GST pull-down技术寻找与PrkA互作的蛋白 | 第49-55页 |
| ·GST-PrkA的表达与纯化 | 第49-50页 |
| ·GST pull-down实验寻找与PrkA互作的蛋白 | 第50-51页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·待验证蛋白的功能简介 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 附录1：prkA基因序列 | 第66-67页 |
| 附录2：sigma54基因序列 | 第67页 |
