| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-31页 |
| 1 β-脱羧脱氢酶家族 | 第11-14页 |
| 2 异柠檬酸脱氢酶家族 | 第14-22页 |
| ·NADP~+-依赖型 IDH 和 NAD~+-依赖型 IDH | 第14页 |
| ·单体 IDH 和二聚体 IDH | 第14-20页 |
| ·IDH 的辅酶和底物特异性及金属离子依赖性 | 第20-21页 |
| ·IDH 蛋白家族的分类 | 第21-22页 |
| 3 铜绿微囊藻 | 第22-23页 |
| ·铜绿微囊藻简介及研究进展 | 第22-23页 |
| ·铜绿微囊藻 IDH 的研究意义 | 第23页 |
| 4 大肠杆菌 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌简介 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌 IDH 的研究进展 | 第24页 |
| ·研究意义和展望 | 第24页 |
| 参考文献 | 第24-31页 |
| 第二章 铜绿微囊藻 IDH 酶学性质研究 | 第31-53页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·培养基与试剂 | 第32-35页 |
| 2 方法 | 第35-41页 |
| ·铜绿微囊藻的培养及染色体 DNA 的制备 | 第35-36页 |
| ·引物设计及 PCR 扩增 | 第36-37页 |
| ·对 PCR 产物进行鉴定、回收、与载体进行连接及转化 | 第37页 |
| ·将重组质粒转化到 E. coli Rosetta (DE3)菌株中进行表达及纯化 | 第37-38页 |
| ·对纯化的蛋白进行 SDS-PAGE 及 Western blot 分析 | 第38-40页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第40页 |
| ·对 MaIDH 的动力学分析 | 第40-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-49页 |
| ·M. aeruginosa PCC7806 基因组提取 | 第41-42页 |
| ·M. aeruginosa IDH 基因的扩增及鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒 pET28b(+)-MaIDH 的获得和鉴定 | 第42-43页 |
| ·MaIDH 蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第43-44页 |
| ·酶动力学分析 | 第44-45页 |
| ·pH 和温度对 MaIDH 活力的影响 | 第45-46页 |
| ·金属离子对 MaIDH 活力的影响 | 第46-47页 |
| ·MaIDH 序列分析 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 第三章 二聚体 NADP-IDH 的单体化改造及鉴定 | 第53-70页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| ·菌株与质粒 | 第53-54页 |
| ·酶及试剂 | 第54页 |
| ·培养基及试剂 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-60页 |
| ·方案一：去除钩状结构域的重组 EcIDH 的构建 | 第54-57页 |
| ·方案二：单体 EcIDH 的构建 | 第57-60页 |
| 3 结果与讨论 | 第60-68页 |
| ·方案一：去除钩状结构域的重组 EcIDH 的构建与鉴定 | 第60-62页 |
| ·方案二：单体 EcIDH 的构建与鉴定 | 第62-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 附：本人在读研期间发表及合作发表科研论文、获奖及参与课题基金情况 | 第71-72页 |
