| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 中英文对照和缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第15-17页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的分类 | 第16页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的催化活性中心 | 第16-17页 |
| ·丝氨酸蛋白酶的底物特异性 | 第17页 |
| ·谷氨酸特异性内肽酶 | 第17-30页 |
| ·谷氨酸特异性内肽酶的来源及分类 | 第18-20页 |
| ·谷氨酸特异性内肽酶的空间结构 | 第20-25页 |
| ·谷氨酸特异性内肽酶底物特异性分析 | 第25-26页 |
| ·谷氨酸特异性内肽酶的成熟化 | 第26-28页 |
| ·谷氨酸特异性内肽酶的应用 | 第28-30页 |
| ·亲和标签简介 | 第30-32页 |
| ·亲和标签的应用 | 第31页 |
| ·亲和标签的去除 | 第31-32页 |
| ·本论文的主要内容及研究意义 | 第32-34页 |
| 第二章 重组 GSE-BL 的表达、纯化与成熟化 | 第34-58页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料与方法 | 第35-43页 |
| ·实验材料 | 第35-38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-56页 |
| ·GSE-BL 前体基因的扩增 | 第43-44页 |
| ·GSE-BL 重组质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·GSE-BL 前体的小量表达 | 第45-47页 |
| ·GSE-BL 前体的表达与纯化 | 第47页 |
| ·GSE-BL 的复性及成熟化 | 第47-49页 |
| ·GSE-BL 的鉴定 | 第49-51页 |
| ·Lys-1Glu 突变 GSE-BL 前体的纯化及成熟化 | 第51-53页 |
| ·不含前肽 GSE-BL 和 27 kD GSE-BL 中间体的表达与纯化 | 第53-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 第三章 重组 GSE-BL 的酶学性质研究 | 第58-66页 |
| ·引言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-60页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-65页 |
| ·GSE-BL 的酶学性质测定 | 第60-62页 |
| ·GSE-BL 热稳定性检测 | 第62页 |
| ·钙离子对 GSE-BL 热稳定性影响 | 第62-63页 |
| ·金属离子对 GSE-BL 酶活力的影响 | 第63-64页 |
| ·GSE-BL 对不同底物催化效率比较 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-66页 |
| 第四章 GSE-BL 作用机理的初步研究 | 第66-89页 |
| ·引言 | 第66-67页 |
| ·材料与方法 | 第67-70页 |
| ·实验材料 | 第67-68页 |
| ·实验方法 | 第68-70页 |
| ·结果与讨论 | 第70-88页 |
| ·GSE-BL 同源建模分析 | 第70-74页 |
| ·GSE-BL 与底物相互作用的模拟 | 第74-75页 |
| ·Val2Ala 突变 GSE-BL 的制备及鉴定 | 第75-76页 |
| ·催化活性中心突变 GSE-BL 的制备及鉴定 | 第76-78页 |
| ·Arg89Ala 突变 GSE-BL 的制备及鉴定 | 第78-79页 |
| ·His190Ala 突变 GSE-BL 的制备及鉴定 | 第79-81页 |
| ·参与二硫键形成氨基酸突变 GSE-BL 的制备及鉴定 | 第81-83页 |
| ·GSE-BL 底物结合口袋的改造 | 第83-88页 |
| ·本章小结 | 第88-89页 |
| 第五章 GSE-BL 提高重组透明颤菌血红蛋白功能的研究 | 第89-104页 |
| ·引言 | 第89-90页 |
| ·材料与方法 | 第90-93页 |
| ·实验材料 | 第90-91页 |
| ·实验方法 | 第91-93页 |
| ·结果与讨论 | 第93-102页 |
| ·重组质粒 pET22b-vgb 构建 | 第93-94页 |
| ·重组 VHb 的表达及纯化 | 第94-95页 |
| ·重组 VHb 中二聚体的含量 | 第95-96页 |
| ·VHb-His6酶处理条件确定及其分离 | 第96-100页 |
| ·VHb 的 CO 结合能力检测 | 第100-101页 |
| ·VHb 的过氧化氢酶活性检测 | 第101页 |
| ·VHb 添加对韦兰胶产量的影响 | 第101-102页 |
| ·本章小结 | 第102-104页 |
| 第六章 GSE-BL 应用于人胰高血糖素的制备 | 第104-118页 |
| ·引言 | 第104-105页 |
| ·材料与方法 | 第105-110页 |
| ·实验材料 | 第105-106页 |
| ·实验方法 | 第106-110页 |
| ·结果与讨论 | 第110-116页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-glucagon 的构建 | 第110-111页 |
| ·酵母重组子的鉴定 | 第111-112页 |
| ·重组胰高血糖素的表达及纯化 | 第112页 |
| ·重组胰高血糖素 GSE-BL 处理时间确定 | 第112-114页 |
| ·重组胰高血糖素标签去除与纯化 | 第114-116页 |
| ·重组胰高血糖素的 HPLC 鉴定 | 第116页 |
| ·本章小结 | 第116-118页 |
| 第七章 GSE-BL 应用于成熟人β防御素-2 的制备 | 第118-129页 |
| ·引言 | 第118页 |
| ·材料与方法 | 第118-121页 |
| ·实验材料 | 第118-119页 |
| ·实验方法 | 第119-121页 |
| ·结果与讨论 | 第121-128页 |
| ·HBD-2 前原肽重组质粒的构建 | 第121-123页 |
| ·重组 HBD-2 前原肽的小量表达 | 第123-124页 |
| ·重组 HBD-2 前原肽的纯化及成熟化 | 第124-125页 |
| ·HBD-2 前原肽及成熟肽 Western-blot 鉴定 | 第125-126页 |
| ·HBD-2 抑菌活性检测 | 第126-127页 |
| ·成熟 HBD-2 细胞毒性检测 | 第127-128页 |
| ·本章小结 | 第128-129页 |
| 结论与展望 | 第129-132页 |
| 结论 | 第129-130页 |
| 论文创新性 | 第130-131页 |
| 展望 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-142页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 附件 | 第146页 |
