| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 英文缩略词表 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-36页 |
| ·非水相酶催化 | 第17-20页 |
| ·非水相酶催化的特点 | 第17-18页 |
| ·影响非水相酶催化反应的因素 | 第18-20页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶 B(CALB) | 第20-27页 |
| ·脂肪酶的简介 | 第20-22页 |
| ·CALB 的来源及特性 | 第22-24页 |
| ·CALB 在非水相催化中的应用 | 第24-27页 |
| ·CALB 应用研究的方向 | 第27页 |
| ·酵母表面展示技术及应用 | 第27-33页 |
| ·酵母细胞表面展示技术简介 | 第27-29页 |
| ·酵母表面展示技术的应用 | 第29-31页 |
| ·酵母展示脂肪酶的表面性质表征 | 第31-33页 |
| ·本研究的主要内容和意义 | 第33-36页 |
| 第二章 细胞表面展示脂肪酶定量方法的建立 | 第36-51页 |
| ·引言 | 第36-37页 |
| ·实验材料和仪器 | 第37-39页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·实验仪器 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·4-MUHP 的合成 | 第39页 |
| ·展示脂肪酶的酵母细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·展示脂肪酶水解活力的测定 | 第40页 |
| ·展示脂肪酶合成活力的测定 | 第40-41页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-49页 |
| ·脂肪酶活性中心滴定溶剂的选择 | 第42-44页 |
| ·脂肪酶活性中心滴定的其他条件 | 第44-46页 |
| ·Pp-CALB 活性中心滴定方法 | 第46页 |
| ·脂肪酶活性中心滴定的验证和应用 | 第46-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 毕赤酵母展示 CALB 催化合成芳香酯 | 第51-70页 |
| ·引言 | 第51-52页 |
| ·实验材料与设备 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验设备 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·展示脂肪酶的酵母细胞的制备 | 第53页 |
| ·展示脂肪酶水解活力的测定 | 第53页 |
| ·展示脂肪酶合成活力的测定 | 第53页 |
| ·酶催化反应 | 第53-54页 |
| ·气相色谱的检测 | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-68页 |
| ·毕赤酵母展示 CALB 的底物选择性 | 第54-57页 |
| ·溶剂对展示 CALB 催化活力的影响 | 第57-58页 |
| ·温度对 Pp-CALB 催化酯化反应的影响 | 第58-59页 |
| ·底物浓度和摩尔比对 Pp-CALB 催化酯化反应的影响 | 第59-60页 |
| ·细胞浓度对 Pp-CALB 催化酯化反应的影响 | 第60-61页 |
| ·在 5 L 搅拌式反应器中合成乙酸酯 | 第61-62页 |
| ·酯化反应动力学的研究 | 第62-65页 |
| ·在 5 L 搅拌式反应器中合成多种芳香酯 | 第65-66页 |
| ·无溶剂体系中合成芳香酯 | 第66-68页 |
| ·本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 毕赤酵母展示脂肪酶催化合成生物柴油 | 第70-84页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·实验材料与设备 | 第71-72页 |
| ·实验材料 | 第71-72页 |
| ·实验设备 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-75页 |
| ·展示脂肪酶的酵母细胞的制备 | 第72页 |
| ·展示脂肪酶活力的测定 | 第72页 |
| ·气相色谱的检测 | 第72-73页 |
| ·实验设计和数据分析 | 第73-75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-83页 |
| ·响应面优化合成生物柴油的条件 | 第75-76页 |
| ·联合使用脂肪酶对转酯反应的影响 | 第76-78页 |
| ·混合溶剂对转酯反应的影响 | 第78-79页 |
| ·搅拌反应器中合成生物柴油 | 第79页 |
| ·利用不同原料合成生物柴油 | 第79-82页 |
| ·展示脂肪酶的操作稳定性 | 第82-83页 |
| ·本章小结 | 第83-84页 |
| 第五章 毕赤酵母展示 CALB 催化区域选择和手性选择反应 | 第84-95页 |
| ·引言 | 第84页 |
| ·实验材料和设备 | 第84-85页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·实验设备 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-88页 |
| ·展示脂肪酶的酵母细胞的制备 | 第85页 |
| ·展示脂肪酶活力的测定 | 第85页 |
| ·展示 CALB 合成月桂酸糖酯 | 第85-86页 |
| ·糖酯纯品的制备 | 第86页 |
| ·薄层层析色谱(TLC)定性分析与 HPLC-ELSD 定量分析 | 第86-87页 |
| ·展示 CALB 拆分手性化合物 | 第87页 |
| ·手性分析 | 第87-88页 |
| ·结果与讨论 | 第88-94页 |
| ·展示 CALB 催化合成葡萄糖月桂酸酯 | 第88-89页 |
| ·展示 CALB 催化合成果糖月桂酸酯 | 第89-91页 |
| ·展示 CALB 催化 -苯乙醇的拆分 | 第91-92页 |
| ·展示 CALB 催化班布特罗的拆分 | 第92-94页 |
| ·本章小结 | 第94-95页 |
| 第六章 毕赤酵母展示 CALB 的表面疏水性修饰 | 第95-112页 |
| ·引言 | 第95-96页 |
| ·实验材料与设备 | 第96-97页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·实验设备 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-100页 |
| ·表面共展示 CALB/疏水蛋白的毕赤酵母重组菌株的构建 | 第97-98页 |
| ·展示脂肪酶(或共展示疏水蛋白)的酵母细胞的制备 | 第98页 |
| ·展示脂肪酶活力的测定 | 第98页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第98页 |
| ·表面活性剂修饰 Pp-CALB | 第98-99页 |
| ·离子液体修饰 Pp-CALB | 第99页 |
| ·MATH 法测细胞表面疏水性 | 第99页 |
| ·修饰后的 Pp-CALB 催化芳香酯的合成 | 第99页 |
| ·修饰后的 Pp-CALB 催化生物柴油的合成 | 第99-100页 |
| ·气相色谱检测 | 第100页 |
| ·结果与讨论 | 第100-110页 |
| ·Pp-CALB 的表面修饰 | 第100-104页 |
| ·修饰后 Pp-CALB 的表面特性的表征 | 第104-106页 |
| ·表面疏水性修饰对 Pp-CALB 非水相催化的影响 | 第106-110页 |
| ·本章小结 | 第110-112页 |
| 结论和展望 | 第112-115页 |
| 参考文献 | 第115-126页 |
| 附录 | 第126页 |
| 附录一 发酵罐制备毕赤酵母展示 CALB | 第126-127页 |
| 附录二 芳香酯的旋转蒸发 | 第127-128页 |
| 附录三 毕赤酵母展示 CALB 生产成本计算 | 第128-129页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 附件 | 第132页 |
