| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 1 研究背景 | 第11-36页 |
| ·NF-κB信号通路概述 | 第11-19页 |
| ·NF-κB转录因子 | 第19-21页 |
| ·IκB | 第21-22页 |
| ·IKK复合物 | 第22-24页 |
| ·TAK1复合物 | 第24-25页 |
| ·泛素链在NF-κB信号通路中的作用 | 第25-27页 |
| ·NF-κB的负反馈调节 | 第27-28页 |
| ·肠致病性大肠杆菌感染的病理特征 | 第28页 |
| ·EPEC造成的A/E lesions与LEE效应蛋白的关系 | 第28-31页 |
| ·肠致病大肠杆菌的non-LEE效应蛋白 | 第31-33页 |
| ·肠致病性大肠杆菌感染时对宿主免疫反应的抑制 | 第33-36页 |
| 2 实验材料和方法 | 第36-67页 |
| ·实验材料 | 第36-44页 |
| ·基因和质粒 | 第36页 |
| ·抗体 | 第36-37页 |
| ·细胞培养 | 第37页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·siRNA,shRNA及引物 | 第37-38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·实验相关溶液配制 | 第38-44页 |
| ·实验方法 | 第44-67页 |
| ·常规载体构建 | 第44-45页 |
| ·构建基因突变体 | 第45-46页 |
| ·shRNA载体构建 | 第46-48页 |
| ·线性泛素链(Tetra-Ub)原核表达载体构建 | 第48页 |
| ·质粒大提 | 第48-49页 |
| ·细胞转染 | 第49-50页 |
| ·RNA提取及逆转录 | 第50-52页 |
| ·利用SDS-PAGE和western blot检测细胞中的蛋白的表达 | 第52-53页 |
| ·双荧光素酶实验 | 第53-54页 |
| ·免疫沉淀 | 第54-55页 |
| ·在细胞提取物中重组TRAF6引起的NF-κB激活 | 第55-56页 |
| ·在大肠杆菌中重组表达并纯化蛋白 | 第56-58页 |
| ·Native ESI样品的准备 | 第58-59页 |
| ·酵母双杂交 | 第59-60页 |
| ·体外重组泛素链的生成及ubiquitin chain pulldown | 第60-61页 |
| ·GST pulldown | 第61-62页 |
| ·体外甲基化实验 | 第62-63页 |
| ·体内甲基化检测 | 第63-64页 |
| ·EPEC感染 | 第64-65页 |
| ·p65免疫荧光 | 第65页 |
| ·活细胞成像 | 第65-67页 |
| 3 实验结果 | 第67-104页 |
| ·NleE可以特异地抑制NF-κB信号通路的激活 | 第67-68页 |
| ·NleE抑制TAK1激活 | 第68-72页 |
| ·NleE作用于TAB2/3并抑制其同泛素链的结合 | 第72-76页 |
| ·NIeE甲基化修饰TAB2/3-NZF上的半胱氨酸 | 第76-81页 |
| ·TAB2/3的半胱氨酸甲基化导致TAB2/3不能同泛素链结合的机制 | 第81-84页 |
| ·NleE对TAB2/3-NZF的修饰依赖于完整的NZF结构 | 第84-87页 |
| ·NleE对TAB2/3的半胱氨酸甲基化修饰是NleE抑制宿主细胞NF-κB信号通路的主要机制 | 第87-90页 |
| ·EPEC效应蛋白NleE在感染时抑制宿主NF-κB信号通路的激活 | 第90-92页 |
| ·不同NZF对NleE的敏感性不同 | 第92-95页 |
| ·NleE作用于ZRANB3 | 第95-99页 |
| ·NleE的晶体结构显示NleE属于一类非常新颖的甲基转移酶 | 第99-102页 |
| ·对NleE-SAM-TAB2-NZF复合物的分子模拟显示TAB2的第673位半胱氨酸最适合作为甲基的受体 | 第102-104页 |
| 4 讨论 | 第104-107页 |
| 参考文献 | 第107-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
