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抑制素新型基因工程疫苗的构建及其免疫效果研究

摘要第1-13页
ABSTRACT第13-16页
缩略语表(按字母顺序排列)第16-18页
第一篇 文献综述第18-48页
 第1章 抑制素免疫技术研究进展第18-48页
   ·抑制素免疫技术的研究第18-32页
     ·抑制素常规免疫研究进展第19-21页
     ·常规抑制素免疫技术的不足之处第21页
     ·抑制素基因免疫技术的研究第21-24页
     ·抑制素基因免疫的优势第24-25页
     ·抑制素基因免疫的局限性第25页
     ·影响抑制素基因免疫效果的因素第25-31页
     ·目前应用于抑制素DNA疫苗中的佐剂第31页
     ·抑制素DNA疫苗的安全性第31-32页
     ·抑制素免疫技术的展望第32页
   ·VP22基因免疫增强佐剂的研究进展第32-39页
     ·编码转导蛋白的VP22基因的研究进展第33-34页
     ·VP22蛋白转导特性的确定第34-35页
     ·VP22蛋白的转运机制第35-36页
     ·VP22在基因治疗中的应用第36-37页
     ·VP22蛋白转导的应用前景第37-38页
     ·小结第38-39页
   ·以减毒沙门氏菌为载体传递疫苗的研究进展第39-47页
     ·以减毒沙门氏菌为载体的疫苗的优点第40-42页
     ·携带基因工程疫苗重组减毒沙门氏菌诱发机体免疫应答的机制第42-44页
     ·减毒沙门氏菌为载体潜在的危险第44页
     ·减毒沙门氏菌载体的应用第44-45页
     ·携带基因疫苗与外源抗原的重组减毒沙门氏菌的研究进展第45-46页
     ·减毒猪霍乱沙门氏菌的研究进展第46-47页
   ·小结第47-48页
第二篇 研究的目和意义第48-50页
第三篇 试验研究内容第50-133页
 第2章 BVP22基因佐剂对抑制素DNA疫苗的免疫效果研究第50-68页
   ·前言第50-51页
   ·试验材料第51-55页
     ·菌株、细胞株及质粒第51页
     ·载体第51-52页
     ·主要试剂第52-53页
     ·主要溶液及其相关缓冲液第53-54页
     ·试验中用到的培养基及制备方法如下第54-55页
     ·引物第55页
     ·试剂盒第55页
     ·实验动物第55页
   ·试验方法第55-63页
     ·VP22基因的扩增第55-56页
     ·pMD18-T-VP22克隆载体的构建及测序第56-59页
     ·融合表达质粒pEGISI-VP22的构建与鉴定第59-60页
     ·pEGISI-VP22重组质粒的表达鉴定:第60-62页
     ·动物试验设计第62页
     ·抗抑制素IgG抗体检测第62-63页
     ·抑制素DNA疫苗免疫后对小鼠繁殖性能的分析第63页
   ·结果与分析第63-67页
     ·VP22目的基因片段的扩增第63页
     ·pEGISI-VP22重组表达质粒的鉴定第63-64页
     ·融合质粒pEGISI-VP22体外表达检测第64-65页
     ·融合质粒pEGISI-VP22转染细胞后在转录水平上的检测第65页
     ·抑制素小鼠试验结果第65-67页
   ·讨论第67-68页
 第3章 BVP22基因佐剂对生长抑素基因疫苗的免疫效果研究第68-77页
   ·前言第68-69页
   ·试验材料与方法第69-72页
     ·菌株、细胞株及质粒第69页
     ·质粒pEGS2SS第69页
     ·主要溶液及其相关缓冲液第69页
     ·扩增SS所用引物第69-70页
     ·实验动物第70页
     ·VP22基因与pEGS2SS载体基因的酶切与回收第70页
     ·融合表达质粒pEGS2SS-VP22的构建与鉴定第70页
     ·融合表达质粒pEGS2SS-VP22的体外表达鉴定第70-71页
     ·生长抑素基因疫苗的制备第71页
     ·试验动物分组第71页
     ·抗生长抑素IgG抗体检测第71页
     ·对小鼠的生长性能的研究第71-72页
   ·结果与分析第72-75页
     ·pEGS2SS-VP22重组表达质粒的鉴定第72页
     ·融合表达质粒pEGS2SS-VP22的融合蛋白体外表达的检测第72-74页
     ·生长抑素小鼠试验结果第74-75页
   ·讨论第75-77页
     ·含VP22基因的融合表达质粒pEGS2SS-VP22的构建与表达鉴定第75页
     ·含VP22基因的生长抑素疫苗的免疫效果第75-76页
     ·小结第76-77页
 第4章 传递抑制素DNA疫苗的重组菌C501(pVAX-asd-IS)的构建及免疫效果评价第77-104页
   ·前言第77-78页
   ·试验材料第78-80页
     ·菌株、细胞株及质粒第78-79页
     ·pVAX1表达载体第79页
     ·主要溶液及其相关缓冲液第79页
     ·引物第79-80页
   ·试验方法第80-89页
     ·asd基因的扩增与酶切第80页
     ·asd与pVAX的酶切第80页
     ·酶切产物的回收与纯化第80-81页
     ·pVAX-asd的连接反应第81页
     ·大肠杆菌χ6097/C500菌株感受态细胞的制备(甘油法)第81页
     ·细菌的电转化第81-82页
     ·pVAX-asd真核表达载体的鉴定第82页
     ·无抗性真核表达质粒pVAX-asd-IS的构建第82-83页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的遗传稳定性研究第83-84页
     ·抑制素真核表达质粒pVAX-asd-IS在Hela细胞中融合蛋白表达检测第84页
     ·疫苗的制备第84页
     ·动物试验安排第84-86页
     ·疫苗安全性的评价第86-89页
   ·结果第89-101页
     ·无抗性真核表达质粒载体的构建第89页
     ·无抗性抑制素真核表达质粒的构建第89-90页
     ·pVAX-asd-IS质粒的体外表达鉴定第90-92页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的遗传稳定性第92-95页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的免疫效果研究第95-97页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的安全性评价第97-101页
   ·讨论第101-104页
     ·平衡致死系统中asd基因筛选标记的质粒pVAX-asd的构建第101页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的构建第101-102页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的遗传稳定性第102页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的免疫效果第102页
     ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的生物安全评价第102-104页
 第5章 免疫途径对重组菌C501(pVAX-asd-IS)免疫效果的影响第104-111页
   ·前言第104-105页
   ·材料与方法第105-107页
     ·菌株、质粒第105页
     ·实验动物第105页
     ·疫苗的制备第105页
     ·动物试验设计第105页
     ·不同途径的免疫效果研究第105-107页
   ·结果第107-109页
     ·不同途径免疫小鼠后的IgG抗体水平检测第107页
     ·不同途径免疫小鼠后的IgA水平检测第107-108页
     ·不同途径免疫小鼠后的IL-4,IFN-γ的含量的检测第108-109页
     ·免疫后小鼠的产仔数统计分析第109页
   ·讨论第109-111页
 第6章 传递抑制素重组抗原的重组菌C501(pYAIS)的构建及免疫效果研究第111-133页
   ·前言第111-112页
   ·试验材料第112-114页
     ·菌株、及质粒第112页
     ·载体第112-114页
     ·主要试剂第114页
     ·主要溶液及其相关缓冲液第114页
   ·试验方法第114-120页
     ·小提质粒第114-115页
     ·质粒酶切第115页
     ·pYAIS的连接反应第115页
     ·电转化第115页
     ·传递抑制素重组抗原的重组菌C501(pYAIS)的构建与鉴定第115-116页
     ·重组菌C501(pYAIS)表达的抑制素融合蛋白免疫反应性检测第116页
     ·重组菌C501(pYAIS)表达条件的优化第116页
     ·重组菌C501(pYAIS)的遗传稳定性研究第116-117页
     ·疫苗的制备第117页
     ·动物试验设计与安排第117-119页
     ·免疫后小鼠的IgG抗体水平检测第119页
     ·免疫后小鼠的IgA抗体滴度检测第119页
     ·免疫后小鼠的产仔数分析第119页
     ·重组菌C501(pYAIS)的安全性评价第119-120页
   ·结果第120-131页
     ·重组菌C501(pYAIS)的构建与鉴定第120-121页
     ·重组菌C501(pYAIS)表达蛋白的免疫反应性检测第121页
     ·重组菌C501(pYAIS)表达融合蛋白温度条件的优化第121-122页
     ·重组菌C501(pYAIS)传代培养后各代细菌的生长规律第122-123页
     ·重组菌C501(pYAIS)传代培养后各代质粒与菌株的检测第123-124页
     ·动物试验结果分析第124-127页
     ·免疫小鼠后的抗抑制素IgA水平第127页
     ·重组菌C501(pYAIS)的安全性评价第127-131页
   ·讨论第131-133页
     ·抑制素疫苗的发展第131页
     ·asd宿主平衡致死系统在抑制素疫苗中的优势第131页
     ·重组菌菌C501(pYAIS)的免疫效果第131页
     ·重组菌菌C501(pYAIS)的安全性评价第131-133页
第四篇 全文总结第133-134页
创新与不足第134-135页
参考文献第135-147页
CURRICULUM VITAE第147-148页
发表的主要论文第148-150页
致谢第150页

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