| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语表(按字母顺序排列) | 第16-18页 |
| 第一篇 文献综述 | 第18-48页 |
| 第1章 抑制素免疫技术研究进展 | 第18-48页 |
| ·抑制素免疫技术的研究 | 第18-32页 |
| ·抑制素常规免疫研究进展 | 第19-21页 |
| ·常规抑制素免疫技术的不足之处 | 第21页 |
| ·抑制素基因免疫技术的研究 | 第21-24页 |
| ·抑制素基因免疫的优势 | 第24-25页 |
| ·抑制素基因免疫的局限性 | 第25页 |
| ·影响抑制素基因免疫效果的因素 | 第25-31页 |
| ·目前应用于抑制素DNA疫苗中的佐剂 | 第31页 |
| ·抑制素DNA疫苗的安全性 | 第31-32页 |
| ·抑制素免疫技术的展望 | 第32页 |
| ·VP22基因免疫增强佐剂的研究进展 | 第32-39页 |
| ·编码转导蛋白的VP22基因的研究进展 | 第33-34页 |
| ·VP22蛋白转导特性的确定 | 第34-35页 |
| ·VP22蛋白的转运机制 | 第35-36页 |
| ·VP22在基因治疗中的应用 | 第36-37页 |
| ·VP22蛋白转导的应用前景 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| ·以减毒沙门氏菌为载体传递疫苗的研究进展 | 第39-47页 |
| ·以减毒沙门氏菌为载体的疫苗的优点 | 第40-42页 |
| ·携带基因工程疫苗重组减毒沙门氏菌诱发机体免疫应答的机制 | 第42-44页 |
| ·减毒沙门氏菌为载体潜在的危险 | 第44页 |
| ·减毒沙门氏菌载体的应用 | 第44-45页 |
| ·携带基因疫苗与外源抗原的重组减毒沙门氏菌的研究进展 | 第45-46页 |
| ·减毒猪霍乱沙门氏菌的研究进展 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 第二篇 研究的目和意义 | 第48-50页 |
| 第三篇 试验研究内容 | 第50-133页 |
| 第2章 BVP22基因佐剂对抑制素DNA疫苗的免疫效果研究 | 第50-68页 |
| ·前言 | 第50-51页 |
| ·试验材料 | 第51-55页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第51页 |
| ·载体 | 第51-52页 |
| ·主要试剂 | 第52-53页 |
| ·主要溶液及其相关缓冲液 | 第53-54页 |
| ·试验中用到的培养基及制备方法如下 | 第54-55页 |
| ·引物 | 第55页 |
| ·试剂盒 | 第55页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-63页 |
| ·VP22基因的扩增 | 第55-56页 |
| ·pMD18-T-VP22克隆载体的构建及测序 | 第56-59页 |
| ·融合表达质粒pEGISI-VP22的构建与鉴定 | 第59-60页 |
| ·pEGISI-VP22重组质粒的表达鉴定: | 第60-62页 |
| ·动物试验设计 | 第62页 |
| ·抗抑制素IgG抗体检测 | 第62-63页 |
| ·抑制素DNA疫苗免疫后对小鼠繁殖性能的分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-67页 |
| ·VP22目的基因片段的扩增 | 第63页 |
| ·pEGISI-VP22重组表达质粒的鉴定 | 第63-64页 |
| ·融合质粒pEGISI-VP22体外表达检测 | 第64-65页 |
| ·融合质粒pEGISI-VP22转染细胞后在转录水平上的检测 | 第65页 |
| ·抑制素小鼠试验结果 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-68页 |
| 第3章 BVP22基因佐剂对生长抑素基因疫苗的免疫效果研究 | 第68-77页 |
| ·前言 | 第68-69页 |
| ·试验材料与方法 | 第69-72页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第69页 |
| ·质粒pEGS2SS | 第69页 |
| ·主要溶液及其相关缓冲液 | 第69页 |
| ·扩增SS所用引物 | 第69-70页 |
| ·实验动物 | 第70页 |
| ·VP22基因与pEGS2SS载体基因的酶切与回收 | 第70页 |
| ·融合表达质粒pEGS2SS-VP22的构建与鉴定 | 第70页 |
| ·融合表达质粒pEGS2SS-VP22的体外表达鉴定 | 第70-71页 |
| ·生长抑素基因疫苗的制备 | 第71页 |
| ·试验动物分组 | 第71页 |
| ·抗生长抑素IgG抗体检测 | 第71页 |
| ·对小鼠的生长性能的研究 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-75页 |
| ·pEGS2SS-VP22重组表达质粒的鉴定 | 第72页 |
| ·融合表达质粒pEGS2SS-VP22的融合蛋白体外表达的检测 | 第72-74页 |
| ·生长抑素小鼠试验结果 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-77页 |
| ·含VP22基因的融合表达质粒pEGS2SS-VP22的构建与表达鉴定 | 第75页 |
| ·含VP22基因的生长抑素疫苗的免疫效果 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 第4章 传递抑制素DNA疫苗的重组菌C501(pVAX-asd-IS)的构建及免疫效果评价 | 第77-104页 |
| ·前言 | 第77-78页 |
| ·试验材料 | 第78-80页 |
| ·菌株、细胞株及质粒 | 第78-79页 |
| ·pVAX1表达载体 | 第79页 |
| ·主要溶液及其相关缓冲液 | 第79页 |
| ·引物 | 第79-80页 |
| ·试验方法 | 第80-89页 |
| ·asd基因的扩增与酶切 | 第80页 |
| ·asd与pVAX的酶切 | 第80页 |
| ·酶切产物的回收与纯化 | 第80-81页 |
| ·pVAX-asd的连接反应 | 第81页 |
| ·大肠杆菌χ6097/C500菌株感受态细胞的制备(甘油法) | 第81页 |
| ·细菌的电转化 | 第81-82页 |
| ·pVAX-asd真核表达载体的鉴定 | 第82页 |
| ·无抗性真核表达质粒pVAX-asd-IS的构建 | 第82-83页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的遗传稳定性研究 | 第83-84页 |
| ·抑制素真核表达质粒pVAX-asd-IS在Hela细胞中融合蛋白表达检测 | 第84页 |
| ·疫苗的制备 | 第84页 |
| ·动物试验安排 | 第84-86页 |
| ·疫苗安全性的评价 | 第86-89页 |
| ·结果 | 第89-101页 |
| ·无抗性真核表达质粒载体的构建 | 第89页 |
| ·无抗性抑制素真核表达质粒的构建 | 第89-90页 |
| ·pVAX-asd-IS质粒的体外表达鉴定 | 第90-92页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的遗传稳定性 | 第92-95页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的免疫效果研究 | 第95-97页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的安全性评价 | 第97-101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| ·平衡致死系统中asd基因筛选标记的质粒pVAX-asd的构建 | 第101页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的构建 | 第101-102页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的遗传稳定性 | 第102页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的免疫效果 | 第102页 |
| ·重组菌C501(pVAX-asd-IS)的生物安全评价 | 第102-104页 |
| 第5章 免疫途径对重组菌C501(pVAX-asd-IS)免疫效果的影响 | 第104-111页 |
| ·前言 | 第104-105页 |
| ·材料与方法 | 第105-107页 |
| ·菌株、质粒 | 第105页 |
| ·实验动物 | 第105页 |
| ·疫苗的制备 | 第105页 |
| ·动物试验设计 | 第105页 |
| ·不同途径的免疫效果研究 | 第105-107页 |
| ·结果 | 第107-109页 |
| ·不同途径免疫小鼠后的IgG抗体水平检测 | 第107页 |
| ·不同途径免疫小鼠后的IgA水平检测 | 第107-108页 |
| ·不同途径免疫小鼠后的IL-4,IFN-γ的含量的检测 | 第108-109页 |
| ·免疫后小鼠的产仔数统计分析 | 第109页 |
| ·讨论 | 第109-111页 |
| 第6章 传递抑制素重组抗原的重组菌C501(pYAIS)的构建及免疫效果研究 | 第111-133页 |
| ·前言 | 第111-112页 |
| ·试验材料 | 第112-114页 |
| ·菌株、及质粒 | 第112页 |
| ·载体 | 第112-114页 |
| ·主要试剂 | 第114页 |
| ·主要溶液及其相关缓冲液 | 第114页 |
| ·试验方法 | 第114-120页 |
| ·小提质粒 | 第114-115页 |
| ·质粒酶切 | 第115页 |
| ·pYAIS的连接反应 | 第115页 |
| ·电转化 | 第115页 |
| ·传递抑制素重组抗原的重组菌C501(pYAIS)的构建与鉴定 | 第115-116页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)表达的抑制素融合蛋白免疫反应性检测 | 第116页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)表达条件的优化 | 第116页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)的遗传稳定性研究 | 第116-117页 |
| ·疫苗的制备 | 第117页 |
| ·动物试验设计与安排 | 第117-119页 |
| ·免疫后小鼠的IgG抗体水平检测 | 第119页 |
| ·免疫后小鼠的IgA抗体滴度检测 | 第119页 |
| ·免疫后小鼠的产仔数分析 | 第119页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)的安全性评价 | 第119-120页 |
| ·结果 | 第120-131页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)的构建与鉴定 | 第120-121页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)表达蛋白的免疫反应性检测 | 第121页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)表达融合蛋白温度条件的优化 | 第121-122页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)传代培养后各代细菌的生长规律 | 第122-123页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)传代培养后各代质粒与菌株的检测 | 第123-124页 |
| ·动物试验结果分析 | 第124-127页 |
| ·免疫小鼠后的抗抑制素IgA水平 | 第127页 |
| ·重组菌C501(pYAIS)的安全性评价 | 第127-131页 |
| ·讨论 | 第131-133页 |
| ·抑制素疫苗的发展 | 第131页 |
| ·asd宿主平衡致死系统在抑制素疫苗中的优势 | 第131页 |
| ·重组菌菌C501(pYAIS)的免疫效果 | 第131页 |
| ·重组菌菌C501(pYAIS)的安全性评价 | 第131-133页 |
| 第四篇 全文总结 | 第133-134页 |
| 创新与不足 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-147页 |
| CURRICULUM VITAE | 第147-148页 |
| 发表的主要论文 | 第148-150页 |
| 致谢 | 第150页 |
