| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-18页 |
| 缩略词表 | 第18-20页 |
| 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-56页 |
| 1 生长抑素基因免疫及其研究进展 | 第22-39页 |
| ·生长抑素的免疫调控 | 第22页 |
| ·生长抑素常规免疫 | 第22-25页 |
| ·合成肽疫苗 | 第22-23页 |
| ·基因工程疫苗 | 第23-24页 |
| ·生长抑素被动免疫 | 第24-25页 |
| ·生长抑素基因免疫 | 第25-39页 |
| ·生长抑素DNA疫苗的构建 | 第27-30页 |
| ·生长抑素DNA疫苗的免疫效力 | 第30-32页 |
| ·生长抑素DNA疫苗的安全性 | 第32-39页 |
| 2 生长抑素基因免疫存在的问题及解决措施 | 第39-48页 |
| ·提高生长抑素DNA疫苗的传递效率 | 第39-43页 |
| ·免疫接种途径的选择 | 第39-41页 |
| ·转染载体的选择 | 第41-43页 |
| ·增强生长抑素DNA疫苗的免疫应答 | 第43-48页 |
| ·细胞因子佐剂 | 第44-46页 |
| ·CpG ODN佐剂 | 第46-47页 |
| ·补体分子佐剂 | 第47页 |
| ·其他分子佐剂 | 第47-48页 |
| ·优化生长抑素DNA疫苗的免疫程序 | 第48页 |
| 3 染色体-质粒平衡致死体系的研究进展 | 第48-54页 |
| ·不同标志基因的平衡致死系统 | 第49-52页 |
| ·以asd为标志基因 | 第49-50页 |
| ·以thyA为标志基因 | 第50-51页 |
| ·以glnA为标志基因 | 第51页 |
| ·hok-sok解离后致死系统 | 第51-52页 |
| ·平衡致死系统的构建 | 第52-53页 |
| ·缺陷型菌株的构建 | 第52页 |
| ·真核表达互补质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·平衡致死系统的应用 | 第53-54页 |
| ·平衡致死系统稳定性的影响因素 | 第54页 |
| 4 生长抑素基因免疫的前景与展望 | 第54-56页 |
| 第二章 非抗性筛选生长抑素真核表达质粒的构建与鉴定 | 第56-75页 |
| 摘要 | 第56页 |
| 引言 | 第56-57页 |
| 1 材料和方法 | 第57-66页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·质粒、细菌和细胞 | 第57页 |
| ·仪器设备 | 第57-58页 |
| ·酶和试剂 | 第58页 |
| ·试剂的配制 | 第58-59页 |
| ·方法 | 第59-66页 |
| ·非抗性筛选生长抑素真核表达质粒的构建 | 第59-64页 |
| ·质粒的表达鉴定 | 第64-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-73页 |
| ·PCR扩增产物的检测 | 第66-67页 |
| ·pVGS/2SS-asd质粒的鉴定 | 第67-68页 |
| ·pGS/2SS-M4GFP-asd质粒的鉴定 | 第68页 |
| ·pVGS/2SS-asd质粒转染后RT-RCR转录鉴定 | 第68-69页 |
| ·pVGS/2SS-asd质粒转染后蛋白活性鉴定 | 第69页 |
| ·pGS/2SS-M4GFP-asd质粒转染后RT-RCR转录鉴定 | 第69-70页 |
| ·pGS/2SS-M4GFP-asd质粒转染后显微观察 | 第70-71页 |
| ·GS/2SS-M4GFP融合蛋白的亚细胞定位 | 第71-72页 |
| ·pGS/2SS-M4GFP-asd质粒转染后蛋白活性鉴定 | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| ·生长抑素DNA疫苗平衡致死系统的建立 | 第73-74页 |
| ·生长抑素融合基因表达产物的免疫活性 | 第74-75页 |
| 第三章 非抗性筛选生长抑素DNA疫苗的稳定性研究 | 第75-85页 |
| 摘要 | 第75页 |
| 引言 | 第75-76页 |
| 1 材料与方法 | 第76-79页 |
| ·材料 | 第76-77页 |
| ·菌株和质粒 | 第76页 |
| ·仪器设备 | 第76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·培养基的配制 | 第76-77页 |
| ·方法 | 第77-79页 |
| ·沙门氏菌电转化感受态的制备 | 第77页 |
| ·质粒电转化C500沙门氏菌 | 第77页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第77页 |
| ·重组菌体外稳定性检测 | 第77-78页 |
| ·重组菌体内稳定性检测 | 第78-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-83页 |
| ·原代重组菌中质粒的双酶切鉴定 | 第79-80页 |
| ·重组菌体外稳定性鉴定 | 第80-82页 |
| ·传代重组菌保守基因invA的扩增 | 第80页 |
| ·传代重组菌中质粒的酶切鉴定 | 第80-81页 |
| ·传代重组菌各代细菌的生长规律观察 | 第81-82页 |
| ·重组菌的体内稳定性鉴定 | 第82-83页 |
| ·脏器中菌落生长计数 | 第82页 |
| ·菌落 PCR鉴定质粒的稳定性 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 第四章 非抗性筛选生长抑素DNA疫苗的免疫应答及影响因素 | 第85-101页 |
| 第一节 非抗性筛选生长抑素DNA疫苗免疫程序的优化 | 第85-95页 |
| 摘要 | 第85页 |
| 引言 | 第85-86页 |
| 1 材料和方法 | 第86-87页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·质粒和菌株 | 第86页 |
| ·主要试剂 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-87页 |
| ·疫苗菌 C500(pVGS/2SS-asd)中质粒的酶切鉴定 | 第86页 |
| ·C500(pVGS/2SS-asd)疫苗的制备 | 第86页 |
| ·疫苗的免疫及样品采集 | 第86-87页 |
| ·实验动物饲养管理 | 第87页 |
| ·生长抑素IgG抗体效价的检测 | 第87页 |
| ·数据分析 | 第87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-93页 |
| ·pVGS/2SS-asd质粒的酶切鉴定 | 第87-88页 |
| ·不同免疫剂量组小鼠的生长抑素抗体效价 | 第88-89页 |
| ·不同免疫程序组小鼠的生长抑素抗体效价 | 第89-90页 |
| ·不同免疫剂量组小鼠的增重比较 | 第90-91页 |
| ·不同免疫程序组小鼠的增重比较 | 第91-93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| ·平衡致死系统对生长抑素DNA疫苗免疫效果的影响 | 第93页 |
| ·免疫程序对非抗性筛选生长抑素DNA疫苗的影响 | 第93-95页 |
| 第二节 非抗性筛选生长抑素DNA疫苗的免疫应答 | 第95-101页 |
| 摘要 | 第95页 |
| 引言 | 第95页 |
| 1 材料和方法 | 第95-97页 |
| ·材料 | 第95-96页 |
| ·质粒和菌株 | 第95页 |
| ·主要试剂 | 第95-96页 |
| ·方法 | 第96-97页 |
| ·疫苗菌C500(pVGS/2SS-asd)中质粒的酶切鉴定 | 第96页 |
| ·疫苗的制备 | 第96页 |
| ·疫苗的免疫及样品采集 | 第96页 |
| ·实验动物饲养管理 | 第96页 |
| ·生长抑素抗体检测 | 第96-97页 |
| ·数据分析 | 第97页 |
| 2 结果与分析 | 第97-99页 |
| ·生长抑素IgG抗体效价 | 第97-98页 |
| ·生长抑素IgG分型抗体效价 | 第98-99页 |
| ·生长抑素IgA抗体效价 | 第99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| ·非抗性生长抑素DNA疫苗诱导产生的免疫应答 | 第99-100页 |
| ·免疫途径对非抗性筛选生长抑素DNA疫苗免疫应答的影响 | 第100-101页 |
| 第五章 非抗性筛选生长抑素DNA疫苗在小鼠体内的组织分布 | 第101-109页 |
| 摘要 | 第101页 |
| 引言 | 第101-102页 |
| 1 材料和方法 | 第102-104页 |
| ·材料 | 第102页 |
| ·质粒和菌株 | 第102页 |
| ·主要试剂 | 第102页 |
| ·实验动物 | 第102页 |
| ·方法 | 第102-104页 |
| ·疫苗的制备 | 第102页 |
| ·实验分组与免疫 | 第102页 |
| ·样品的采集 | 第102页 |
| ·RNA的提取与检测 | 第102-103页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第103-104页 |
| ·内参基因的PCR扩增 | 第104页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-107页 |
| ·RNA质量检测 | 第104页 |
| ·重组菌口服免疫后在小鼠组织中的表达分布 | 第104-105页 |
| ·重组菌肌肉注射后在小鼠组织中的表达分布 | 第105-107页 |
| 3 讨论 | 第107-109页 |
| ·非抗性筛选生长抑素DNA疫苗在小鼠体内的表达分布 | 第107-108页 |
| ·免疫途径对生长抑素DNA疫苗表达分布的影响 | 第108-109页 |
| 第六章 非抗性筛选生长抑素DNA疫苗免疫小鼠的毒性研究 | 第109-128页 |
| 第一节 一般毒性的观察与检测 | 第109-121页 |
| 摘要 | 第109页 |
| 引言 | 第109页 |
| 1 材料与方法 | 第109-112页 |
| ·材料 | 第109-110页 |
| ·疫苗 | 第109-110页 |
| ·实验动物 | 第110页 |
| ·主要试剂 | 第110页 |
| ·方法 | 第110-112页 |
| ·疫苗的制备 | 第110页 |
| ·实验分组 | 第110页 |
| ·血常规检测 | 第110页 |
| ·石蜡切片的制作 | 第110-112页 |
| ·数据分析 | 第112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-119页 |
| ·血液学指标检测 | 第112-113页 |
| ·组织病理学观察 | 第113-119页 |
| 3 讨论 | 第119-121页 |
| ·生长抑素DNA疫苗免疫后对小鼠血液指标的影响 | 第119页 |
| ·生长抑素DNA疫苗免疫后对小鼠组织的毒性分析 | 第119-121页 |
| 第二节 染色体整合分析 | 第121-128页 |
| 摘要 | 第121页 |
| 引言 | 第121页 |
| 1 材料与方法 | 第121-124页 |
| ·材料 | 第121-122页 |
| ·疫苗 | 第121页 |
| ·酶及试剂盒 | 第121页 |
| ·其它试剂的配制 | 第121-122页 |
| ·方法 | 第122-124页 |
| ·疫苗的制备及免疫 | 第122页 |
| ·组织的准备 | 第122页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第122-123页 |
| ·基因组DNA的纯化 | 第123页 |
| ·基因组DNA浓度测定 | 第123页 |
| ·内参基因的扩增 | 第123页 |
| ·目的基因的扩增 | 第123-124页 |
| ·PCR灵敏度的检测 | 第124页 |
| 2 结果与分析 | 第124-127页 |
| ·PCR灵敏度检测结果 | 第124-125页 |
| ·内参基因扩增结果 | 第125-126页 |
| ·目的基因扩增结果 | 第126-127页 |
| 3 讨论 | 第127-128页 |
| 全文结论 | 第128-129页 |
| 创新与不足 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-146页 |
| 已发表研究论文 | 第146-148页 |
| CURRICULUM VITAE | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149页 |
