| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 缩略词 | 第9-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-32页 |
| ·类脂 A 的结构和功能研究进展 | 第16-22页 |
| ·类脂 A 的结构 | 第16页 |
| ·类脂 A 的生物合成与转运 | 第16-20页 |
| ·类脂 A 结构的修饰调节 | 第20-21页 |
| ·类脂 A 的信号通路 | 第21-22页 |
| ·脂肪酸转移酶 LpxD 的研究进展 | 第22-25页 |
| ·LpxD 的晶体结构 | 第22-23页 |
| ·LpxD 的“分子尺” | 第23-24页 |
| ·LpxD 的应用前景 | 第24-25页 |
| ·弗朗西斯菌类脂 A 的结构和功能研究进展 | 第25-27页 |
| ·弗朗西斯菌概述 | 第25-26页 |
| ·弗朗西斯菌类脂 A 的结构修饰和调节 | 第26-27页 |
| ·类脂 A 的应用前景 | 第27-28页 |
| ·致病菌和内毒素的检测 | 第27-28页 |
| ·工业微生物膜通透性改造 | 第28页 |
| ·减毒疫苗和疫苗佐剂开发 | 第28页 |
| ·立题背景与研究内容 | 第28-32页 |
| ·立题背景 | 第28-29页 |
| ·研究目的 | 第29页 |
| ·研究思路与研究内容 | 第29-32页 |
| 第二章 弗朗西斯菌类脂 A 结构多样性的鉴定 | 第32-56页 |
| ·引言 | 第32-33页 |
| ·材料与方法 | 第33-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第33-34页 |
| ·试剂和仪器 | 第34-35页 |
| ·培养基和培养条件 | 第35页 |
| ·总脂质的 Bligh-Dyer（BD）提取方法 | 第35页 |
| ·薄层层析（TLC）分析方法 | 第35页 |
| ·总脂质的一步（OS）提取方法 | 第35页 |
| ·脂多糖的 Hot-Phenol 提取方法 | 第35-36页 |
| ·脂多糖的 Folch 纯化方法 | 第36页 |
| ·脂多糖的 Vogel 纯化方法 | 第36-37页 |
| ·脂多糖的碱水解 | 第37页 |
| ·气相色谱（GC）的样品处理和分析方法 | 第37页 |
| ·MALDI-TOF/TOF-MS 质谱分析方法 | 第37页 |
| ·QIT-TOF-MS 质谱分析方法 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-54页 |
| ·弗朗西斯菌总脂质的结构分析 | 第38-43页 |
| ·弗朗西斯菌不同亚种的总脂质结构分析 | 第43-45页 |
| ·温度对弗朗西斯菌类脂 A 结构的影响 | 第45-47页 |
| ·弗朗西斯菌类脂 A 结构多样性的鉴定 | 第47-51页 |
| ·弗朗西斯菌类脂 A 中间代谢物 Lipid X 的鉴定 | 第51页 |
| ·弗朗西斯菌类脂 A 结构变化的动态模拟 | 第51-54页 |
| ·本章小结 | 第54-56页 |
| 第三章 弗朗西斯菌 lpxD1 和 lpxD2 基因的鉴定及转录调控分析 | 第56-72页 |
| ·引言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-60页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·试剂和仪器 | 第57页 |
| ·培养基和培养条件 | 第57页 |
| ·引物 | 第57-58页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 的克隆和表达 | 第58-59页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 的定点突变 | 第59页 |
| ·脂多糖的提取 | 第59页 |
| ·类脂 A 的提取 | 第59页 |
| ·类脂 A 的质谱结构鉴定 | 第59页 |
| ·RNA 提取和荧光定量 PCR | 第59页 |
| ·基因测序 | 第59页 |
| ·基因芯片 | 第59页 |
| ·脂多糖刺激人巨噬细胞（THP-1） | 第59-60页 |
| ·脂多糖刺激小鼠巨噬细胞（MHS） | 第60页 |
| ·细胞因子测定 | 第60页 |
| ·结果与讨论 | 第60-70页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 的序列鉴定 | 第60-63页 |
| ·温度对 lpxD1 和 lpxD2 基因转录的影响 | 第63-64页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 的异源表达 | 第64-66页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 异源表达后的点突变分析 | 第66-68页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 异源表达后底物选择性分析 | 第68-69页 |
| ·lpxD1 和 lpxD2 异源表达后脂多糖信号转导分析 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第四章 LpxD1 和 LpxD2 蛋白纯化及功能分析 | 第72-86页 |
| ·引言 | 第72-73页 |
| ·材料和方法 | 第73-77页 |
| ·菌株和质粒 | 第73页 |
| ·试剂和仪器 | 第73页 |
| ·培养基和培养条件 | 第73页 |
| ·引物 | 第73页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第73页 |
| ·Holo-ACP 蛋白纯化 | 第73-74页 |
| ·LpxD1 和 LpxD2 的高效表达和蛋白纯化 | 第74-75页 |
| ·脂肪酸链酰基化（Acylation）反应 | 第75页 |
| ·UDP32-GlcNAc 的制备 | 第75页 |
| ·LpxA 反应 | 第75-76页 |
| ·LpxC 反应 | 第76页 |
| ·LpxD 反应 | 第76页 |
| ·P32标记底物的 TLC 分离和酶活力的测定 | 第76-77页 |
| ·结果和讨论 | 第77-85页 |
| ·Acyl-ACP 的底物的纯化与制备 | 第77-80页 |
| ·UDP~(32)-O-acyl-GlcN 的合成与制备 | 第80页 |
| ·LpxD1 和 LpxD2 的高效表达与纯化 | 第80-82页 |
| ·温度对 LpxD1 和 LpxD2 酶活力的影响 | 第82-83页 |
| ·LpxD1 和 LpxD2 的底物特异选择性 | 第83-84页 |
| ·pH 值对 LpxD1 和 LpxD2 酶活力的影响 | 第84页 |
| ·金属离子对 LpxD1 和 LpxD2 酶活力的影响 | 第84-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 第五章 ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株的构建及其类脂 A 结构分析 | 第86-102页 |
| ·引言 | 第86-87页 |
| ·材料与方法 | 第87-89页 |
| ·菌株和质粒 | 第87页 |
| ·试剂和仪器 | 第87页 |
| ·培养基和培养条件 | 第87页 |
| ·引物 | 第87页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株的构建 | 第87页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株回补体的构建 | 第87页 |
| ·弗朗西斯菌的化学转化方法 | 第87-89页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株类脂 A 的提取 | 第89页 |
| ·类脂 A 的碱裂解 | 第89页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株类脂 A 的质谱鉴定 | 第89页 |
| ·MHS 和 THP-1 的细胞培养 | 第89页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株在培养基中的生长曲线 | 第89页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株在巨噬细胞生长情况 | 第89页 |
| ·结果与讨论 | 第89-99页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株的构建 | 第89-90页 |
| ·温度对ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株类脂 A 结构的影响 | 第90-91页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株类脂 A 的碱裂解 | 第91-93页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株类脂 A 结构多样性的鉴定 | 第93-94页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株回补体的构建及类脂 A 结构鉴定 | 第94-98页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株体内体外生长情况 | 第98-99页 |
| ·本章小结 | 第99-102页 |
| 第六章 ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株的功能研究 | 第102-114页 |
| ·引言 | 第102-103页 |
| ·材料与方法 | 第103-105页 |
| ·菌株和质粒 | 第103页 |
| ·试剂和仪器 | 第103页 |
| ·培养基和培养条件 | 第103页 |
| ·脂多糖刺激 THP-1 细胞实验 | 第103页 |
| ·阳离子抗菌肽敏感性实验 | 第103页 |
| ·抗生素最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第103-104页 |
| ·溴化乙锭细胞膜通透性测定 | 第104页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株的毒力测定 | 第104页 |
| ·ΔlpxD1 突变株在小鼠器官内的生长情况 | 第104页 |
| ·ΔlpxD1 突变株的免疫保护实验 | 第104-105页 |
| ·结果与讨论 | 第105-112页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株脂多糖的细胞转导分析 | 第105-106页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株细胞膜通透性分析 | 第106-107页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 抗菌肽抗性分析 | 第107页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株的抗生素敏感性分析 | 第107-108页 |
| ·ΔlpxD1 和ΔlpxD2 突变株毒力分析 | 第108-109页 |
| ·ΔlpxD1 突变株在小鼠体内的生长情况 | 第109-110页 |
| ·ΔlpxD1 突变株对小鼠的免疫保护 | 第110-112页 |
| ·本章小结 | 第112-114页 |
| 主要结论与展望 | 第114-120页 |
| 主要结论 | 第114-117页 |
| 展望 | 第117-120页 |
| 论文主要创新点 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 附录A：F. novicida 全基因芯片数据分析 | 第136-142页 |
| 附录B：作者在攻读博士学位期间发表(含待发表)论文及成果 | 第142-143页 |
