| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·概述 | 第11-12页 |
| ·微生物菊粉酶的生产 | 第12页 |
| ·菊粉酶的酶学性质 | 第12-16页 |
| ·菊粉酶的专一性 | 第13页 |
| ·菊粉酶的分子量 | 第13-14页 |
| ·温度和 pH 对酶活性和稳定性的影响 | 第14-16页 |
| ·酶反应动力学 | 第16页 |
| ·菊粉酶的催化机制 | 第16页 |
| ·菊粉酶的分子生物学特性 | 第16-20页 |
| ·菊粉酶分子结构的研究进展 | 第20-21页 |
| ·本课题的立题背景和意义 | 第21页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第二章 Aspergillus ficuum 菊粉酶基因的克隆及序列分析 | 第22-36页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第22-23页 |
| ·酶与药品、试剂盒 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·培养基与培养条件 | 第23页 |
| ·试剂配制 | 第23-24页 |
| ·无花果曲霉总 DNA 的提取 | 第24页 |
| ·菊粉酶基因序列的 PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·目的片段的纯化与回收 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的 TA 克隆 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·菊粉酶基因序列测定及序列分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-35页 |
| ·无花果曲霉总 DNA 的提取 | 第27页 |
| ·菊粉酶基因序列的 PCR 扩增和克隆 | 第27-29页 |
| ·菊粉酶 endo I 和 exo I 的序列分析 | 第29-32页 |
| ·Aspergillus ficuum JNSP5-06 菊粉酶与其它菊粉酶一级结构的同源性比较 | 第32-34页 |
| ·Aspergillus ficuum JNSP5-06 菊粉酶的系统进化树分析 | 第34页 |
| ·Aspergillus ficuum JNSP5-06 菊粉酶二级结构分析及三维结构建模 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 Aspergillus ficuum 菊粉酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第36-48页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·材料与方法 | 第36-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·酶与药品、试剂盒 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| ·培养基与培养条件 | 第37页 |
| ·试剂配制 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第38页 |
| ·目的基因与 pET-28a(+)质粒连接 | 第38页 |
| ·表达重组质粒转化大肠杆菌 | 第38页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第38页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第38页 |
| ·重组粗酶液的提取 | 第38页 |
| ·大肠杆菌表达产物的分析 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-47页 |
| ·菊粉酶大肠杆菌表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·菊粉酶表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第40-43页 |
| ·内、外切菊粉酶表达量差异的影响因素分析 | 第43-44页 |
| ·菊粉酶在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第44-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第四章 Aspergillus ficuum 大肠杆菌重组菊粉酶的酶学性质 | 第48-63页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-50页 |
| ·实验菌株 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·培养基与培养条件 | 第48页 |
| ·菊粉酶活力测定方法 | 第48页 |
| ·大肠杆菌重组菊粉酶的纯化 | 第48-49页 |
| ·重组菊粉酶的分子量测定 | 第49页 |
| ·酶学性质的测定 | 第49-50页 |
| ·重组菊粉酶的水解产物分析 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-62页 |
| ·大肠杆菌重组菊粉酶的纯化 | 第50-52页 |
| ·纯化酶的纯度鉴定和相对分子质量的测定 | 第52-53页 |
| ·酶学性质的测定 | 第53-59页 |
| ·重组菊粉酶的水解产物分析 | 第59-62页 |
| ·酶学性质的比较与分析 | 第62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 Aspergillus ficuum 内切菊粉酶催化残基的定点突变 | 第63-73页 |
| ·前言 | 第63页 |
| ·材料与方法 | 第63-66页 |
| ·菌株与质粒 | 第63页 |
| ·酶、药品与培养基 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63-64页 |
| ·同源建模与结构预测 | 第64页 |
| ·一步法质粒 PCR 定向诱变法 | 第64-65页 |
| ·突变重组内切菊粉酶的诱导表达 | 第65页 |
| ·突变重组内切菊粉酶的纯化 | 第65页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第65-66页 |
| ·突变重组内切菊粉酶活力检测 | 第66页 |
| ·突变重组内切酶的酶学性质 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-72页 |
| ·endo I 同源建模及目标模型的评价 | 第66-68页 |
| ·催化残基及相关位点的确定 | 第68页 |
| ·催化残基的定向诱变 | 第68-69页 |
| ·突变重组内切菊粉酶的表达 | 第69-70页 |
| ·突变对内切菊粉酶活性的影响 | 第70-72页 |
| ·本章小结 | 第72-73页 |
| 第六章 Aspergillus ficuum 菊粉酶 C 端结构域的功能研究 | 第73-82页 |
| ·前言 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-76页 |
| ·菌株与质粒 | 第73页 |
| ·酶与药品、试剂盒 | 第73-74页 |
| ·主要仪器 | 第74页 |
| ·培养基与培养条件 | 第74页 |
| ·定向突变方法 | 第74-75页 |
| ·重组表达载体的构建、筛选与鉴定 | 第75页 |
| ·突变重组酶的诱导表达 | 第75页 |
| ·蛋白质免疫印迹 | 第75-76页 |
| ·突变重组酶活力检测 | 第76页 |
| ·结果与分析 | 第76-81页 |
| ·定向突变方案的确定 | 第76-77页 |
| ·菊粉酶基因 C 端缺失的定向突变 | 第77-78页 |
| ·菊粉酶基因 C 端交换的定向突变 | 第78-80页 |
| ·C 端突变重组酶的表达 | 第80-81页 |
| ·C 端突变对菊粉酶活性的影响 | 第81页 |
| ·本章小结 | 第81-82页 |
| 论文主要结论与展望 | 第82-84页 |
| 论文创新点 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
