| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的生物学特性 | 第14-15页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的血清型分类 | 第14页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的形态学特征及相关特性 | 第14页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的培养特性及理化特性 | 第14-15页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的危害 | 第15-17页 |
| ·猪肺疫和猪萎缩性鼻炎 | 第15-16页 |
| ·牛出血性败血症 | 第16页 |
| ·禽霍乱 | 第16页 |
| ·兔巴氏杆菌病 | 第16-17页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的毒力因子及其致病机理 | 第17-20页 |
| ·脂多糖 | 第17页 |
| ·荚膜 | 第17-18页 |
| ·外膜蛋白 | 第18-19页 |
| ·皮肤坏死毒素 | 第19-20页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的检测方法和疫苗研究进展 | 第20-22页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的检测方法 | 第20-21页 |
| ·多杀性巴氏杆菌病的疫苗研究 | 第21-22页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的交义保护性研究进展 | 第22-23页 |
| ·实验目的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 猪源多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定 | 第24-33页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| ·病料来源 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·培养基和溶液配制 | 第25页 |
| 2 实验方法和步骤 | 第25-28页 |
| ·病料采集、病原菌分离纯化 | 第25页 |
| ·分离株的微生物学特性 | 第25-26页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的种和血清型的PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·对小鼠半数致死量的测定 | 第27-28页 |
| 3 结果分析 | 第28-31页 |
| ·病原分离纯化与微生物学特性 | 第28页 |
| ·生化试验鉴定结果 | 第28-29页 |
| ·药敏试验结果 | 第29-30页 |
| ·种属和血清型PCR鉴定结果 | 第30-31页 |
| ·对小鼠半数致死量测定结果 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 猪源多杀性巴氏杆菌pIpE基因的克隆与序列分析 | 第33-48页 |
| 1 实验材料 | 第33-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·溶液配制 | 第34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 2 试验方法和步骤 | 第35-40页 |
| ·A型猪源多杀性巴氏杆菌的总DNA提取 | 第35页 |
| ·A型猪源多杀性巴氏杆菌的pIpE基因的PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·目的基因的克隆及鉴定 | 第36-39页 |
| ·序列测定及其生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 3 结果分析 | 第40-46页 |
| ·pIpE基因的信号肽分析结果 | 第40-41页 |
| ·pIpE基因的扩增、克隆与鉴定 | 第41-42页 |
| ·序列测定结果及其生物信息学分析结果 | 第42-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| ·关于目的蛋白的选取 | 第46-47页 |
| ·关于引物设计 | 第47页 |
| ·关于pIpE成熟蛋白的生物信息学 | 第47-48页 |
| 第四章 猪源多杀性巴氏杆菌pIpE基因的原核表达及其纯化 | 第48-62页 |
| 1 材料 | 第48-50页 |
| ·菌株和载体 | 第48页 |
| ·血清 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48-49页 |
| ·溶液配制 | 第49-50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-55页 |
| ·制备多杀性巴氏杆菌分离株的兔高免血清 | 第50-51页 |
| ·重组克隆质粒和表达载体的双酶切 | 第51页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第51页 |
| ·重组表达质粒的转化与鉴定 | 第51页 |
| ·pIpE在重组表达菌中的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE电泳方法 | 第52页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第52-53页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性检测 | 第53页 |
| ·重组表达蛋白的Western Blot检测 | 第53-54页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·重组表达蛋白的透析复性 | 第55页 |
| 3 结果分析 | 第55-59页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第55页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白表达的条件优化 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测结果 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白的Western Blot检测 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的纯化和浓度测定 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| ·关于原核表达系统 | 第59-60页 |
| ·关于SDS-PAGE | 第60页 |
| ·关于诱导表达的条件 | 第60页 |
| ·关于包涵体 | 第60-61页 |
| ·关于Western Blot分析 | 第61页 |
| ·关于重组蛋白的纯化和复性 | 第61-62页 |
| 第五章 猪源多杀性巴氏杆菌pIpE重组蛋白对小鼠的交叉免疫保护性研究 | 第62-67页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| ·菌株和重组蛋白 | 第62页 |
| ·实验动物 | 第62页 |
| ·实验试剂及配制 | 第62-63页 |
| ·主要仪器设备 | 第63页 |
| 2 实验方法 | 第63-64页 |
| ·灭活菌苗的制备 | 第63页 |
| ·重组蛋白疫苗制备 | 第63页 |
| ·免疫小鼠 | 第63页 |
| ·攻毒实验 | 第63-64页 |
| 3 结果分析 | 第64-65页 |
| ·灭活菌苗的检验 | 第64页 |
| ·小鼠的免疫与攻毒结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 全文总结 | 第67-68页 |
| 实验的创新与不足 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
