| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 文献综述 | 第14-31页 |
| 第一章 Nramp1 基因研究进展 | 第14-21页 |
| ·Nramp1 基因的发现 | 第14-15页 |
| ·动物中 Nramp1 基因的发现 | 第14-15页 |
| ·植物中 Nramp1 基因的发现 | 第15页 |
| ·酵母和细菌中 Nramp1 基因的发现 | 第15页 |
| ·Nramp1 基因的序列分析及其多态性 | 第15-17页 |
| ·Nramp1 基因序列分析 | 第15-16页 |
| ·Nramp1 基因选择性剪接 | 第16-17页 |
| ·Nramp1 基因多态性研究进展 | 第17页 |
| ·NRAMP1 的结构分析与亚细胞定位 | 第17-18页 |
| ·NRAMP1 蛋白在抵抗动物病原微生物浸染中作用机制 | 第18-21页 |
| ·二价金属离子流出机理 | 第19-20页 |
| ·二价金属离子流入机理 | 第20-21页 |
| 第二章 布鲁氏菌病与转基因动物研究进展 | 第21-31页 |
| ·布鲁氏菌病的病原学特征 | 第21-23页 |
| ·布鲁氏菌形态学 | 第21页 |
| ·布鲁氏菌分类 | 第21-22页 |
| ·布鲁氏菌生长和培养特性 | 第22页 |
| ·布鲁氏菌的抵抗力 | 第22页 |
| ·布鲁氏菌基因组特征 | 第22-23页 |
| ·布鲁氏菌病的检测方法 | 第23-24页 |
| ·细菌学方法 | 第23页 |
| ·血清学方法 | 第23页 |
| ·分子生物学方法 | 第23-24页 |
| ·布鲁氏菌病的治疗与预防 | 第24-25页 |
| ·布鲁氏菌病的治疗 | 第24页 |
| ·布鲁氏菌病的预防 | 第24-25页 |
| ·Nramp1 基因防治牛布鲁氏菌病的前景 | 第25页 |
| ·转基因动物研究概况 | 第25-31页 |
| ·转基因动物的制作方法 | 第26-29页 |
| ·转基因动物的应用 | 第29-31页 |
| 试验研究 | 第31-84页 |
| 第三章 牛 Nramp1 基因的分子克隆 | 第31-41页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·主要试剂与材料 | 第31-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·牛 Nramp1 基因的克隆及测序分析 | 第32-34页 |
| ·牛 Nramp1 基因和 NRAMP1-ISO 基因真核表达载体的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒 pEGFP-NRAMP1 和 pEGFP-NRAMP1-ISO 转染牛成纤维细胞（BEF） | 第35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·牛 Nramp1 基因的克隆及序列分析 | 第35-37页 |
| ·NRAMP1-ISO 基因的序列分析 | 第37页 |
| ·Nramp1 和 NRAMP1-ISO 真核表达载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白 EGFP-NRAMP1 和 EGFP-NRAMP1-ISO 的表达 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第四章 NRAMP1 蛋白的溶酶体定位信号鉴定 | 第41-60页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·仪器设备 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-47页 |
| ·Nramp1 基因氨基端（N 端）融合表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·载体 pAA.140-375、pAA.263-375 和 pAA.263-334 的构建 | 第43-45页 |
| ·NRAMP1 羧基端（C 端）融合表达载体的构建 | 第45页 |
| ·载体 pAA.372-430 和 pAA.372-394 的构建 | 第45-46页 |
| ·NRAMP1 内部信号肽序列的预测和表达载体的构建 | 第46页 |
| ·细胞培养与转染 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-58页 |
| ·NRAMP1 氨基端载体的构建 | 第47-48页 |
| ·表达载体 pAA.140-375、pAA.263-375 和 pAA.263-334 的构建 | 第48页 |
| ·NRAMP1 羧基端融合表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·载体 pAA.372-430 和 pAA.372-394 的构建 | 第49-50页 |
| ·NRAMP1 内部信号肽序列载体的构建 | 第50页 |
| ·NRAMP1 氨基末端区域的亚细胞定位 | 第50-52页 |
| ·NRAMP1 的 AA.263-375 区域的定位特征 | 第52-53页 |
| ·NRAMP1 羧基末端区域的亚细胞定位 | 第53-55页 |
| ·MORN 结构域在 NRAMP1 定位中的作用 | 第55-56页 |
| ·NRAMP1 内部信号肽是溶酶体定位信号 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第五章 牛 Nramp1 基因的功能验证 | 第60-71页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·主要实验材料和试剂 | 第60-61页 |
| ·主要实验仪器 | 第61页 |
| ·细胞和菌株 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-64页 |
| ·Nramp1 基因扩增和连接 pGEM-T-easy 载体 | 第61页 |
| ·表达载体的构建 | 第61-63页 |
| ·表达载体 pCMV-N 和 pSP-N 的检测 | 第63页 |
| ·载体 pCMV-N 和 pSP-N 稳定转染小鼠巨噬细胞 | 第63-64页 |
| ·抗菌试验 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-68页 |
| ·表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·表达载体的检测 | 第65-66页 |
| ·筛选和检测稳定转染牛 Nramp1 基因的巨噬细胞 RAW264.7 | 第66-67页 |
| ·抗菌试验 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| ·小结 | 第70-71页 |
| 第六章 转 Nramp1 基因克隆牛的研制及初步检测 | 第71-84页 |
| ·材料 | 第71-73页 |
| ·主要材料和试剂 | 第71-72页 |
| ·主要仪器设备 | 第72-73页 |
| ·方法 | 第73-76页 |
| ·牛耳皮肤成纤维细胞（BEF）的分离培养 | 第73页 |
| ·Nramp1 巨噬细胞特异性表达载体 pSP-N 稳定转染 BEF | 第73-74页 |
| ·稳定转染 BEF 的鉴定 | 第74页 |
| ·转基因克隆胚胎构建 | 第74-75页 |
| ·转基因克隆胚的移植 | 第75页 |
| ·克隆牛流产胎儿的初步检测 | 第75-76页 |
| ·结果 | 第76-82页 |
| ·秦川犊牛耳皮肤成纤维细胞的分离培养 | 第76-77页 |
| ·测定 BEF 的 G418 最小致死量 | 第77页 |
| ·pSP-N 质粒稳定转染 BEF 细胞珠的筛选与鉴定 | 第77-78页 |
| ·转基因克隆胚胎的体外发育和检测 | 第78-79页 |
| ·克隆牛流产胎儿的检测 | 第79-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 全文结论 | 第84-85页 |
| 论文创新点和进一步研究的课题 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简介 | 第102-103页 |
