| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 引言 | 第12-36页 |
| ·壳聚糖概述 | 第12-13页 |
| ·壳寡糖的制备 | 第13页 |
| ·酶法降解壳聚糖的研究 | 第13-16页 |
| ·非专一性降解酶对壳聚糖的降解研究 | 第14-16页 |
| ·专一性降解酶对壳聚糖的降解研究 | 第16页 |
| ·壳聚糖酶的国内外研究进展 | 第16-33页 |
| ·壳聚糖酶的发现 | 第16-17页 |
| ·壳聚糖酶产生菌 | 第17-18页 |
| ·壳聚糖酶的制备 | 第18-19页 |
| ·壳聚糖酶的理化性质 | 第19-27页 |
| ·壳聚糖酶的分类 | 第27-30页 |
| ·壳聚糖酶基因的克隆和表达 | 第30-31页 |
| ·壳聚糖酶结构和功能的关系 | 第31-32页 |
| ·壳聚糖酶的功能及应用 | 第32-33页 |
| ·壳聚糖酶的研究进展 | 第33页 |
| ·问题与展望 | 第33-34页 |
| ·研究目的和意义 | 第34页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第34-36页 |
| 2 壳聚糖酶高产菌株的筛选和鉴定 | 第36-49页 |
| ·材料与仪器设备 | 第36-38页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·仪器设备 | 第36-37页 |
| ·培养基及培养条件 | 第37页 |
| ·壳聚糖与胶体壳聚糖 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·产酶菌株的分离 | 第38页 |
| ·壳聚糖酶活力测定 | 第38-39页 |
| ·16S rDNA 序列鉴定 | 第39页 |
| ·形态特征鉴定 | 第39-40页 |
| ·生理生化特性鉴定 | 第40页 |
| ·OU01 菌株的安全性试验方法 | 第40页 |
| ·薄层色谱法初步检验发酵液中酶的组成 | 第40页 |
| ·实验结果 | 第40-47页 |
| ·菌株初筛结果 | 第40-41页 |
| ·菌株复筛结果 | 第41-42页 |
| ·OU01 菌株的鉴定 | 第42-45页 |
| ·OU01 安全性试验 | 第45-47页 |
| ·OU01 产壳聚糖酶的组成 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 3 菌株OU01 产壳聚糖酶发酵条件的研究 | 第49-69页 |
| ·材料与仪器设备 | 第50-51页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50-51页 |
| ·仪器设备 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·壳聚糖酶活力测定 | 第51页 |
| ·发酵条件优化 | 第51-54页 |
| ·实验结果 | 第54-65页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第54-56页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第56-57页 |
| ·碳氮比对产酶的影响 | 第57页 |
| ·Plackett-Burman 设计结果 | 第57-59页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第59-60页 |
| ·中心组合实验 | 第60-64页 |
| ·发酵过程曲线的测定 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-68页 |
| ·初始发酵培养基的选择 | 第65-66页 |
| ·关于产酶的影响因素 | 第66-67页 |
| ·不同微生物产壳聚糖酶活力的对比 | 第67页 |
| ·OU01 产壳聚糖酶的合成模式 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 4 壳聚糖酶的分离纯化与鉴定 | 第69-78页 |
| ·材料与仪器设备 | 第69-70页 |
| ·菌种 | 第69页 |
| ·培养基及培养条件 | 第69页 |
| ·材料与试剂 | 第69-70页 |
| ·仪器设备 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-72页 |
| ·壳聚糖粗酶的制备 | 第70-71页 |
| ·壳聚糖酶的纯化 | 第71页 |
| ·壳聚糖酶活力测定方法 | 第71页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第71-72页 |
| ·SDS-PAGE 进行蛋白质纯度鉴定 | 第72页 |
| ·酶组分的质谱鉴定 | 第72页 |
| ·实验结果 | 第72-77页 |
| ·壳聚糖酶的分离纯化 | 第72-75页 |
| ·利用 SDS-PAGE 对酶组分的纯度鉴定 | 第75页 |
| ·质谱鉴定结果 | 第75-77页 |
| ·讨论 | 第77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 5 壳聚糖酶酶学性质的研究 | 第78-91页 |
| ·材料与仪器设备 | 第78页 |
| ·材料和试剂 | 第78页 |
| ·仪器设备 | 第78页 |
| ·实验方法 | 第78-81页 |
| ·壳聚糖酶活测定 | 第78页 |
| ·水解底物-壳聚糖粘度变化测定 | 第78-79页 |
| ·壳聚糖酶催化反应条件分析 | 第79-81页 |
| ·实验结果 | 第81-89页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第81-82页 |
| ·pH 对酶活性的影响 | 第82-83页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第83-84页 |
| ·底物的特异性 | 第84-85页 |
| ·壳聚糖酶 ChiN 和 ChiX 对底物壳聚糖溶液粘度的影响 | 第85-86页 |
| ·壳聚糖酶 ChiN 和 ChiX 降解壳聚糖产物初步分析 | 第86-88页 |
| ·壳聚糖酶动力学常数（K_M和V_(MAX)）的测定 | 第88-89页 |
| ·讨论 | 第89-90页 |
| ·小结 | 第90-91页 |
| 6 酶促反应制备壳寡糖 | 第91-98页 |
| ·材料与仪器设备 | 第91页 |
| ·材料 | 第91页 |
| ·仪器设备 | 第91页 |
| ·实验方法 | 第91-93页 |
| ·内切酶和外切酶的分离 | 第91-92页 |
| ·还原糖浓度测定 | 第92页 |
| ·壳寡糖分子量测定 | 第92页 |
| ·最适酶反应温度的测定 | 第92页 |
| ·最适酶反应 pH 的测定 | 第92页 |
| ·最适酶反应底物质量浓度的测定 | 第92页 |
| ·最适酶量的测定 | 第92页 |
| ·最适酶反应时间的测定 | 第92-93页 |
| ·实验结果 | 第93-96页 |
| ·内切酶和外切酶的分离 | 第93页 |
| ·最适酶解反应温度和和最适 pH 值的测定 | 第93-95页 |
| ·最适酶解反应底物浓度和最适酶用量的测定 | 第95-96页 |
| ·最适酶解反应时间的测定 | 第96页 |
| ·壳寡糖分子量测定 | 第96页 |
| ·讨论 | 第96页 |
| ·小结 | 第96-98页 |
| 7 壳聚糖酶基因的克隆与序列分析 | 第98-118页 |
| ·材料与仪器设备 | 第98-99页 |
| ·细菌的培养 | 第98页 |
| ·试剂 | 第98页 |
| ·仪器设备 | 第98-99页 |
| ·实验方法 | 第99-106页 |
| ·壳聚糖酶部分序列的克隆 | 第99-100页 |
| ·基因组步移文库的构建 | 第100-103页 |
| ·序列拼接 | 第103-104页 |
| ·序列分析和系统进化分析 | 第104页 |
| ·体外重组表达及重组蛋白活性分析 | 第104-106页 |
| ·实验结果 | 第106-116页 |
| ·基因组DNA 的限制性内切酶酶切分析 | 第107页 |
| ·基因扩增与序列分析 | 第107-112页 |
| ·分子系统进化分析 | 第112-113页 |
| ·三维结构模拟分析 | 第113-114页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第114-115页 |
| ·重组蛋白质谱鉴定 | 第115页 |
| ·重组蛋白的活性分析 | 第115-116页 |
| ·讨论 | 第116-117页 |
| ·小结 | 第117-118页 |
| 8 结论 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 博士论文工作期间发表论文及获奖情况 | 第134页 |
