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兔病毒性出血症病毒YL株VP60基因的克隆与生物信息分析及原核表达与转化串叶松香草研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-10页
第一章 文献综述第10-32页
   ·兔出血症病毒及其疫苗的研究进展第10-17页
     ·兔出血症病毒概述第10-14页
     ·兔出血症病毒疫苗的研究进展第14-16页
     ·兔出血症病毒疫苗的应用前景第16-17页
   ·植物基因工程疫苗研究进展第17-27页
     ·植物基因工程疫苗及可食用疫苗概述第17-18页
     ·植物基因工程疫苗的原理及研究进展第18-23页
     ·植物基因工程疫苗的优缺点和应对策略及发展前景第23-27页
   ·根癌农杆菌介导的植物遗传转化第27-30页
     ·根癌农杆菌介导的遗传转化机制第27-29页
     ·根癌农杆菌介导的遗传转化方法第29-30页
   ·串叶松香草研究概况第30-31页
   ·本研究的目的和意义第31-32页
第二章 YL 株衣壳蛋白(VP60)基因的克隆和生物信息分析第32-47页
   ·材料第32-33页
     ·病毒材料第32页
     ·质粒与菌株第32页
     ·试剂和仪器第32-33页
     ·培养基与溶液第33页
     ·PCR 引物第33页
   ·方法第33-39页
     ·引物设计第33页
     ·病毒RNA 的提取第33-34页
     ·病毒VP60 基因的反转录(RT)和PCR第34-35页
     ·RT-PCR 产物的克隆及测序第35-37页
     ·VP60 基因的生物信息学分析第37-39页
   ·结果与分析第39-45页
     ·YL 株RHDV 基因组RNA 的提取第39页
     ·YL 株VP60 基因的扩增第39页
     ·重组质粒的鉴定第39-40页
     ·YL 株VP60 基因的序列测定和编码蛋白分子特征第40页
     ·RHDV VP60 基因的生物信息分析第40-45页
   ·讨论第45-46页
   ·小结第46-47页
第三章 兔出血症病毒YL 株衣壳蛋白VP60 基因在原核系统中的高效表达第47-56页
   ·材料第47-48页
     ·质粒与菌株第47页
     ·主要试剂和仪器第47页
     ·培养基与主要溶液第47-48页
     ·PCR 引物第48页
   ·方法第48-51页
     ·VP60 基因表达质粒的构建与转化第48-49页
     ·VP60 的诱导表达第49页
     ·重组表达VP60 的SDS-PAGE 检测第49-50页
     ·Western blot 检测第50-51页
   ·结果与分析第51-55页
     ·原核表达载体VP60-pET32a 的构建第51-52页
     ·VP60-pET32a 的鉴定第52页
     ·VP60 的表达和SDS-PAGE 检测第52-53页
     ·重组表达VP60 的Western blot 免疫反应第53-55页
   ·讨论第55页
   ·小结第55-56页
第四章 串叶松香草高效再生体系的建立与外壳蛋白基因VP60 的遗传转化第56-67页
   ·材料第56-57页
     ·植物材料及质粒与菌株第56页
     ·主要试剂和仪器第56页
     ·培养基与主要溶液第56-57页
     ·PCR 引物第57页
   ·方法第57-60页
     ·再生体系的建立第57-59页
     ·植物表达载体VP60-pBI121 的构建及对农杆菌的转化第59-60页
     ·遗传转化体系的建立第60页
   ·结果与分析第60-64页
     ·串叶松香草高频再生培养基的筛选第60-61页
     ·植物表达载体VP60-pBI121 的构建第61-63页
     ·串叶松香草遗传转化体系的建立第63-64页
   ·讨论第64-66页
   ·小结第66-67页
结论第67-68页
参考文献第68-76页
附录第76-79页
致谢第79-80页
作者简介第80页

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