| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表(Abbreviations) | 第13-14页 |
| 第一章 骨骼肌发育中miR-148a功能研究 | 第14-59页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| ·研究问题的由来 | 第14页 |
| ·文献综述 | 第14-24页 |
| ·骨骼肌的发育 | 第14-18页 |
| ·MicroRNA概述 | 第18-21页 |
| ·骨骼肌发育相关microRNAs | 第21-22页 |
| ·miR-148a的研究概况 | 第22页 |
| ·RhoA/ROCK信号通路对骨骼肌发育的影响 | 第22-24页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·用于实验的细胞系 | 第25页 |
| ·miR-148a模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitors) | 第25页 |
| ·抗体 | 第25页 |
| ·用于细胞增殖实验的试剂 | 第25页 |
| ·荧光素酶报告载体和荧光素酶检测试剂盒 | 第25-26页 |
| ·ROCK1 siRNA | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-37页 |
| ·技术路线 | 第27页 |
| ·细胞培养 | 第27页 |
| ·细胞RNA提取 | 第27-28页 |
| ·TagMan miRNA的表达分析 | 第28-29页 |
| ·细胞转染 | 第29页 |
| ·Western blot | 第29-32页 |
| ·免疫荧光 | 第32页 |
| ·细胞增殖实验 | 第32页 |
| ·流式细胞术检测细胞周期 | 第32-33页 |
| ·定量PCR | 第33-34页 |
| ·荧光素酶报告实验 | 第34-36页 |
| ·基因芯片 | 第36页 |
| ·siRNA干扰ROCK1实验 | 第36页 |
| ·乳鼠骨骼肌原代细胞的分离 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-53页 |
| ·C2C12体外分化 | 第37-38页 |
| ·miR-148a在C2C12成肌细胞分化过程中呈上调表达 | 第38-39页 |
| ·miR-148a促进C2C12成肌细胞分化 | 第39-41页 |
| ·过表达miR-148a促进C2C12细胞分化 | 第39-40页 |
| ·抑制miR-148a阻碍C2C12成肌细胞分化 | 第40-41页 |
| ·miR-148a促进骨骼肌原代细胞的分化 | 第41-43页 |
| ·miR-148a对C2C12成肌细胞增殖的影响 | 第43-45页 |
| ·过表达miR-148a对细胞增殖的影响 | 第43-44页 |
| ·抑制miR-148a对细胞增殖的影响 | 第44-45页 |
| ·miR-148a对C2C12成肌细胞的细胞周期影响 | 第45-46页 |
| ·过表达miR-148a C2C12细胞的全基因组表达谱分析 | 第46-48页 |
| ·miR-148a靶标基因ROCK1的验证 | 第48-52页 |
| ·荧光素酶报告试验 | 第48-50页 |
| ·miR-148a对C2C12成肌细胞内源性ROCK1的调控 | 第50页 |
| ·miR-148a对骨骼肌原代细胞内源性ROCK1的调控 | 第50-52页 |
| ·干扰ROCK1对C2C12和骨骼肌原代细胞分化的影响 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·miR-148a正向调控肌肉分化 | 第53-54页 |
| ·miR-148a加强细胞周期G1期的阻滞但不影响细胞的增殖 | 第54页 |
| ·miR-148a抑制靶标基因ROCK1的蛋白表达 | 第54-55页 |
| ·ROCK1对成肌细胞分化的抑制作用 | 第55-57页 |
| 5 小结 | 第57-59页 |
| ·本研究的主要结果与结论 | 第57-58页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第58页 |
| ·本研究不足之处与进一步工作的建议 | 第58-59页 |
| 第二章 骨骼肌基因表达分析qPCR中内参基因的选择 | 第59-81页 |
| 1 前言 | 第59-66页 |
| ·研究问题的由来 | 第59页 |
| ·文献综述 | 第59-65页 |
| ·荧光定量PCR | 第59-62页 |
| ·内参基因 | 第62-65页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第65-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-70页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·实验动物 | 第66页 |
| ·常规试剂和试剂盒 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-70页 |
| ·技术路线 | 第67页 |
| ·总RNA的提取 | 第67页 |
| ·cDNA合成 | 第67-68页 |
| ·候选内参基因的引物和探针设计 | 第68-69页 |
| ·探针实时荧光定量PCR | 第69页 |
| ·数据分析 | 第69-70页 |
| 3 结果 | 第70-78页 |
| ·总RNA的提取 | 第70-71页 |
| ·六个候选基因的PCR扩增产物 | 第71页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增曲线图 | 第71页 |
| ·六个候选内参基因的表达水平 | 第71-72页 |
| ·NormFinder程序对候选基因稳定性分析 | 第72-73页 |
| ·BestKeeper程序对候选基因稳定性分析 | 第73-74页 |
| ·geNorm程序对候选基因稳定性分析 | 第74-78页 |
| 4 讨论 | 第78-79页 |
| 5 小结 | 第79-81页 |
| ·本研究的主要结果与结论 | 第79-80页 |
| ·本研究的创新点与特色 | 第80页 |
| ·本研究不足之处与进一步工作的建议 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 攻读学位期间撰写论文题录 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
