毕赤酵母植酸酶工程菌的改造及其初步发酵工艺研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 前言 | 第6-27页 |
| ·毕赤酵母表达系统研究进展 | 第6-18页 |
| ·毕赤酵母的生物学特征 | 第6-7页 |
| ·毕赤酵母表达系统的开发及其特点 | 第7-8页 |
| ·毕赤酵母表达系统的构成 | 第8-13页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白 | 第13-18页 |
| ·植酸酶研究进展 | 第18-25页 |
| ·植酸是一种抗营养因子 | 第18页 |
| ·植酸酶简介 | 第18-20页 |
| ·植酸酶的开发利用及研究进展 | 第20-25页 |
| ·植酸酶基因的多样性 | 第20-21页 |
| ·植酸酶的性质研究 | 第21-22页 |
| ·植酸酶的基因工程研究进展 | 第22-25页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 材料和方法 | 第27-37页 |
| ·主要实验材料和实验仪器 | 第27-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第27页 |
| ·菌种和质粒 | 第27页 |
| ·工具酶 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·PCR引物 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·DNA操作 | 第30-34页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母转化 | 第35-36页 |
| ·酶活定义及测定方法 | 第36页 |
| ·植酸酶酶活性的平板检测和摇瓶发酵 | 第36-37页 |
| 结果与分析 | 第37-45页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第37-42页 |
| ·PCR扩增结果 | 第37-40页 |
| ·重组表达载体酶切验证 | 第40-41页 |
| ·毕赤酵母重组子的平板酶活力验证 | 第41页 |
| ·毕赤酵母重组子的PCR验证 | 第41-42页 |
| ·摇瓶发酵和酶活力测定 | 第42-45页 |
| ·摇瓶发酵的生物量测定 | 第42页 |
| ·磷标准曲线制作 | 第42-43页 |
| ·酶活测定结果及分析 | 第43-45页 |
| 讨论 | 第45-49页 |
| ·关于DNA操作 | 第45-47页 |
| ·PCR引物的设计 | 第45页 |
| ·PCR反应的技巧 | 第45-46页 |
| ·连接反应 | 第46页 |
| ·多拷贝的制作 | 第46-47页 |
| ·发酵工艺的优化 | 第47页 |
| ·提高外源蛋白的表达量 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
