| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-23页 |
| 1. 1，3-丙二醇的物理、化学性质 | 第10页 |
| 2. 1，3-丙二醇(PDO) 的主要用途 | 第10-11页 |
| 3. PDO的生产方法 | 第11-13页 |
| ·化学合成法 | 第11页 |
| ·微生物发酵法 | 第11-13页 |
| 二、克雷伯氏肺炎杆菌1,3-丙二醇代谢途径研究与改造 | 第13-19页 |
| 1 肺炎克克雷伯氏菌代谢 | 第13-15页 |
| 2 1,3-丙二醇基因工程菌的构建 | 第15-19页 |
| ·过量表达还原途径中的限速酶编码基因 | 第15-16页 |
| ·敲除氧化途径中无益副产物编码基因 | 第16-17页 |
| ·构建辅酶再生系统 | 第17页 |
| ·在甘油产生菌中构建合成1,3-丙二醇的基因工程菌 | 第17-18页 |
| ·在E. coli 构建利用葡萄糖合成1,3-丙二醇的基因工程菌 | 第18-19页 |
| 三、本论文的立题依据和研究内容 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第二部分 实验内容 | 第23-55页 |
| 第一章 实验材料与方法 | 第23-40页 |
| ·主要的仪器设备和试剂 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·酶及试剂 | 第23-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·E. coli 用培养基 | 第25-26页 |
| ·Klebsiella 用培养基 | 第26页 |
| ·发酵条件 | 第26-27页 |
| ·分析方法 | 第27-33页 |
| ·高效液相色谱分析方法 | 第27-30页 |
| ·3-羟基丙醛分析方法 | 第30页 |
| ·生物量的测定 | 第30-31页 |
| ·D 型/L 型乳酸含量的测定 | 第31-33页 |
| ·菌体胞内酶活性的测定方法 | 第33-35页 |
| ·细胞提取物的准备方法 | 第33页 |
| ·1,3-丙二醇氧化还原酶活性测定方法 | 第33页 |
| ·甘油脱氢酶活性测定方法 | 第33-34页 |
| ·甘油脱水酶活性测定方法 | 第34页 |
| ·蛋白质的测定 | 第34-35页 |
| ·DNA 操作方法 | 第35-40页 |
| ·细菌基因组DNA 的提取方法 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA 的提取方法 | 第36-37页 |
| ·PCR 产物的回收方法 | 第37页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·热冲击法转化感受态细胞 | 第38页 |
| ·电转化 | 第38-39页 |
| ·Klebsiella 两亲本接合 | 第39-40页 |
| 第二章 ldh基因的克隆及ldh缺失突变株的构建 | 第40-49页 |
| ·自杀质粒pGP704-AP 的改造及重组自杀质粒pGP704-Cm-ldh 的构建 | 第40-41页 |
| ·Klebsiella. pneumoniae AC02 的ldh 基因克隆与分析 | 第41-44页 |
| ·质粒pGP704-Cm 的构建 | 第44-47页 |
| ·基因敲除及乳酸缺失突变株的筛选 | 第47-49页 |
| 第三章 Klebsiella pneumonia AC02 重组菌株的发酵特性 | 第49-55页 |
| ·发酵过程中关键酶酶活性变化 | 第49-51页 |
| ·乳酸脱氢酶酶活性 | 第49页 |
| ·1,3-丙二醇和2,3-丁二醇氧化还原酶酶活性 | 第49-50页 |
| ·甘油脱水酶和甘油脱氢酶酶活性 | 第50-51页 |
| ·突变株和野生型菌株流加补料发酵结果比较 | 第51-55页 |
| ·微氧条件下克雷伯氏肺炎杆菌野生株5 升发酵罐发酵结果 | 第51-52页 |
| ·微氧条件下LDH-突变株5 升发酵罐发酵结果 | 第52页 |
| ·微氧条件下突变株LDH 与野生株发酵结果比较 | 第52-53页 |
| ·微氧条件下突变株LDH 与野生型菌株甘油转化率的比较 | 第53-54页 |
| ·生物柴油副产物甘油发酵产1,3-丙二醇 | 第54-55页 |
| 结论与展望 | 第55-56页 |
| 结论 | 第55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 个人简历 | 第58-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文和参加课题 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
