| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略语 | 第11-12页 |
| 第一部分 综述 | 第12-22页 |
| 第一章 高危型HPV 与宫颈癌研究进展 | 第12-17页 |
| 1 HPV 的结构 | 第12-13页 |
| 2 HPV 分型及分布 | 第13-14页 |
| 3 高危型HPV 的致癌机理 | 第14-15页 |
| ·影响HPV 感染的因素 | 第14页 |
| ·p53 蛋白、pRb 蛋白与E6、E7 蛋白相互作用导致癌变 | 第14-15页 |
| ·HPV 感染与端粒酶的激活 | 第15页 |
| ·性激素引发癌变 | 第15页 |
| 4 HPV 感染的临床过程 | 第15-16页 |
| 5 结语 | 第16-17页 |
| 第二章 宫颈癌疾病治疗研究的进展 | 第17-22页 |
| 1 HPV 与宫颈癌的检测 | 第17-18页 |
| ·巴氏涂片与宫颈癌的检测 | 第17-18页 |
| ·HPV 的血清学检测 | 第18页 |
| ·HPV 的核酸检测 | 第18页 |
| 2 HPV 治疗研究现状 | 第18-21页 |
| ·临床治疗 | 第18-19页 |
| ·疫苗 | 第19-21页 |
| ·基因疫苗 | 第19-20页 |
| ·病毒样颗粒(VLPs) | 第20-21页 |
| ·其他治疗方式 | 第21页 |
| 3 结语 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验与结果 | 第22-47页 |
| 第一章 HPV16E2 基因原核表达载体构建及蛋白表达 | 第22-32页 |
| 1 材料与方法 | 第22-23页 |
| ·菌株、质粒和试验动物 | 第22页 |
| ·LB 培养基 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-27页 |
| ·HPV16E2 基因PCR 扩增的引物设计 | 第23页 |
| ·HPV16E2 基因的PCR 扩增 | 第23页 |
| ·HPV16E2 基因克隆载体的构建及序列分析 | 第23-25页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第23页 |
| ·目的片段与T 载体的连接 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的转化和筛选 | 第24页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第24-25页 |
| ·测序 | 第25页 |
| ·测序结果分析 | 第25页 |
| ·质粒和载体的酶切和回收 | 第25-26页 |
| ·基因片段HPV16E2 和原核表达载体pMAL-p2X 的连接 | 第26页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第26页 |
| ·HPV16E2 基因在大肠杆菌中的表达 | 第26页 |
| ·E2 融合蛋白在大肠杆菌中的大量诱导表达和纯化 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| ·HPV16E2 基因的克隆 | 第27页 |
| ·pMAL/HPV16E2 基因原核表达载体的构建及鉴定 | 第27-30页 |
| ·目的蛋白的诱导表达及纯化 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 第二章 HPV16E2 基因真核表达载体的构建及抗血清制备 | 第32-37页 |
| 1 材料与方法 | 第32-33页 |
| ·菌株、质粒和试验动物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·Western blotting 相关试剂 | 第33页 |
| ·ELISA 相关试剂 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pCDNA3/HPV16E2 构建及在小鼠脏器中的表达 | 第33页 |
| ·抗血清的制备 | 第33-34页 |
| ·Western blotting 检测 | 第34页 |
| ·抗体水平检测 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-36页 |
| ·HPV16E2 基因在小鼠肝脏中的瞬时表达 | 第34-35页 |
| ·抗血清的制备及特异性分析 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 HPV16E2 基因在SiHa 细胞中的表达及分析 | 第37-47页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| ·菌株、质粒和试验动物 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·细胞的复苏及培养 | 第38页 |
| ·细胞传代 | 第38-39页 |
| ·质粒转染SiHa 细胞 | 第39页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·总RNA 的提取 | 第39页 |
| ·消化RNA 中的DNA | 第39-40页 |
| ·反转录PCR | 第40页 |
| ·HPV16E2 m RNA 的表达 | 第40-41页 |
| ·HPV16E2 蛋白质表达 | 第41页 |
| ·HPV16E2 对SiHa 细胞的影响 | 第41页 |
| ·HPV16E2 对SiHa 细胞HPV16E6 m RNA 表达的抑制作用 | 第41页 |
| ·HPV16E2 对SiHa 细胞生长的影响 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·HPV16E2 m RNA 在SiHa 细胞中的表达 | 第41-42页 |
| ·E2 蛋白在SiHa 细胞中的表达 | 第42页 |
| ·HPV16E2 抑制HPV16E6 mRNA 的表达 | 第42-43页 |
| ·SiHa 细胞生长状态的比较 | 第43-44页 |
| ·HPV16E2 对SiHa 细胞生长的抑制 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 个人简历 | 第56-57页 |
